木薯MeSCL30基因的克隆及功能鉴定

发布时间：2022-08-10 11:17

　　木薯（Manihot esculenta Crantz,cassava）是世界七大作物之一,也是热带地区主要的粮食作物,然而干旱、盐碱、低温等环境因素导致木薯产量严重降低。前期研究表明选择性剪接参与许多生理反应过程,是响应非生物胁迫的一种重要转录后调控机制。富含丝氨酸和精氨酸的SR蛋白（serine/arginine-rich proteins,SR）是一类重要的剪接因子,其在植物响应非生物胁迫过程中具有重要作用。生物信息分析表明Me SCL30是木薯SR蛋白家族成员之一,因此本论文旨在解析Me SCL30蛋白的重要功能,获得的主要研究结果如下:1、克隆木薯Me SCL30蛋白编码区片段,并通过Gateway体系构建植物表达载体。通过农杆菌侵染转化到拟南芥中,筛选得到纯合株系进行后续表型分析。2、生物信息学分析表明:Me SCL30基因全长为816bp,编码271个氨基酸,富含53个带正电荷的Arg残基,蛋白大小约为31k D,等电点p I为11.16,含有7个外显子和6个内含子,是亲水的碱性蛋白。Me SCL30蛋白包含RRM结构域和RS结构域,与拟南芥At SCL30的亲缘关系最近... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 木薯介绍
    1.2 植物对干旱胁迫的响应机制
        1.2.1 干旱胁迫下植物水分生理的变化
        1.2.2 干旱胁迫下植物脱落酸(ABA)的生物合成变化
        1.2.3 植物分子水平的干旱胁迫响应
    1.3 选择性剪接
        1.3.1 选择性剪接介绍
        1.3.2 选择性剪接过程
        1.3.3 选择性剪接与疾病
    1.4 SR蛋白研究进展
        1.4.1 SR蛋白的介绍与分类
        1.4.2 SR蛋白的功能调控
    1.5 研究的目的与意义
    1.6 技术路线
2 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及载体
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 木薯苗的扩繁
        2.2.2 木薯RNA提取
        2.2.3 RNA反转录成c DNA
        2.2.4 半定量PCR
        2.2.5 实时荧光定量PCR
        2.2.6 基因克隆及载体构建
        2.2.7 亚细胞定位
        2.2.8 拟南芥转化
        2.2.9 转基因拟南芥纯合株系的筛选与鉴定
        2.2.10 转基因拟南芥表型分析
        2.2.11 酶活测定
        2.2.12 生理指标测定
3 结果与分析
    3.1 生物信息学分析
    3.2 氨基酸序列比对及进化树分析
        3.2.1 MeSCL30氨基酸序列比对
        3.2.2 MeSCL30进化树分析
    3.3 启动子顺式作用元件分析
    3.4 不同胁迫处理后MeSCL30基因的剪接变化
    3.5 不同胁迫处理后MeSCL30在木薯叶片中的表达
    3.6 MeSCL30的克隆与载体构建
    3.7 MeSCL30蛋白的亚细胞定位
    3.8 MeSCL30在木薯不同组织部位的表达
    3.9 过表达MeSCL30拟南芥阳性株系筛选
    3.10 MeSCL30转基因拟南芥高表达株系筛选
    3.11 过表达MeSCL30拟南芥在培养皿上的表型
        3.11.1 Sorbitol处理后生长表型分析
        3.11.2 Sorbitol萌发表型分析
        3.11.3 ABA处理后生长表型分析
        3.11.4 ABA处理后萌发表型分析
    3.12 过表达MeSCL30拟南芥在土中的表型
    3.13 理化特性分析
    3.14 干旱胁迫相关基因的表达
4 讨论
5 结论
参考文献
在读期间参与的科研简介
附录
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]木薯MeTPS7基因克隆及其在非生物胁迫下的表达分析[J]. 丁泽红,付莉莉,吴春来,胡伟.  分子植物育种. 2018(07)
[2]干旱胁迫对木薯SC5抗性生理指标的影响[J]. 王树昌,于晓玲,阮孟斌,李淑霞,彭明.  分子植物育种. 2018(04)
[3]血清前列腺特异性抗原同源异构体2在前列腺癌诊断中的应用价值[J]. 闫存玲,李志艳,何群,欧海利,史晓敏,李海霞,焦莉莉,李峻,苏晋伟,冯珍如.  中华检验医学杂志. 2015 (12)
[4]木薯叶的营养价值、抗营养因子及其在生猪生产中的应用[J]. 冀凤杰,侯冠彧,张振文,王定发,李茂,周汉林.  热带作物学报. 2015(07)
[5]水杨酸与脱落酸对干旱胁迫下玉米种子萌发的影响[J]. 彭浩,王晓强,赵强,尹春光,秦宏伟.  济宁学院学报. 2015(03)
[6]选择性剪接调控的研究进展[J]. 徐谷峰,周承亮,黄荷凤.  上海交通大学学报(医学版). 2015(05)
[7]木薯肉与木薯皮营养成分的研究初报[J]. 魏艳,黄洁,许瑞丽,安飞飞.  热带作物学报. 2015(03)
[8]LEA蛋白及其在植物抗逆改良中的应用[J]. 王艳蓉,张治国,吴金霞.  生物技术通报. 2015(03)
[9]脱落酸对干旱胁迫下茶树生理特性的影响[J]. 周琳,徐辉,朱旭君,陈暄,王玉花,房婉萍,黎星辉.  茶叶科学. 2014(05)
[10]两个大豆GmSBP基因的特征、亚细胞定位及对非生物胁迫的响应[J]. 杨艳,王爽,黄丽燕,马洪雨,舒英杰,何小玲,麻浩.  生物工程学报. 2014(11)

硕士论文
[1]木薯SR蛋白家族的系统命名及表达分析[D]. 马思雅.海南大学 2018



本文编号：3673541