环核苷酸磷酸二酯酶PDE9A的体外表达、纯化与酶活特性分析

发布时间：2022-11-09 20:57

　　环核苷酸磷酸二酯酶PDE9A作为研究具有调节血糖等功效的天然活性物质的新型靶点,日益受到关注。通过异丙基硫代半乳糖苷诱导大肠杆菌BL21感受态细胞表达获得PDE9A,并通过Ni-NAT琼脂糖树脂亲和柱、Q-Sepharose离子交换纯化系统和Sephacryl S300分子筛纯化系统进行逐级纯化,最终获得高纯度的PDE9A蛋白,并应用高效液相色谱进行酶活特性检测,证明制备得到的蛋白质具有较高的水解cGMP能力,能够为新型降血糖功能性食品的开发提供依据。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 菌体与质粒
        1.1.2 实验试剂
    1.2 仪器与设备
        1.2.1 实验仪器
        1.2.2 蛋白纯化柱
    1.3 实验方法
        1.3.1 重组pET15b-PDE9A质粒诱导表达
        1.3.2 PDE9A蛋白纯化
            1.3.2. 1 菌体破碎
            1.3.2. 2 基于重组蛋白多重性质的分离纯化
        1.3.3 PDE9A酶活力测定
        1.3.4 最适反应温度的测定
        1.3.5 最适pH值的测定
        1.3.6 Mg2+离子和DTT对酶活力的影响
    1.4 数据处理
2 结果与分析
    2.1 pET15b-PDE9A质粒诱导表达分析
    2.2 PDE9A蛋白的分离纯化分析
    2.3 PDE9A蛋白酶活性分析
    2.4 PDE9A蛋白最适反应温度分析
    2.5 PDE9A蛋白最适反应pH值分析
    2.6 Mg2+和DTT对酶活力的影响分析
3 结论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3704881