人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究

发布时间：2022-12-09 17:25

　　人源溶菌酶（Human lysozyme,HLZ）是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）中诱导表达;利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对（GSSG/GSH）、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案。研究结果表明:37℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kD的重组人源溶菌酶的表达,包涵体表达量约为380 mg/L（湿重）。包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法。进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度... 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒和菌株
        1.1.2 酶和试剂
        1.1.3 仪器与设备
    1.2 方法
        1.2.1 人源溶菌酶基因的优化与合成
        1.2.2 在大肠杆菌中表达重组人源溶菌酶表达载体的构建
        1.2.3 人源溶菌酶在大肠杆菌中的诱导表达及可溶性检测
        1.2.4 人源溶菌酶包涵体复性条件的研究
            1.2.4.1 复性方式对人源溶菌酶复性的影响
            1.2.4.2 GSSG/GSH浓度比值对人源溶菌酶复性的影响
            1.2.4.3 精氨酸浓度对人源溶菌酶复性的影响
            1.2.4.4 甘油浓度对人源溶菌酶复性的影响
        1.2.5 人源溶菌酶抗菌活性的检测
2 结果
    2.1 人源溶菌酶基因的优化与合成
    2.2 在大肠杆菌中表达重组人源溶菌酶表达载体的构建
    2.3 人源溶菌酶的诱导表达及可溶性检测
    2.4 人源溶菌酶包涵体复性条件的研究
        2.4.1 复性方式对人源溶菌酶复性的影响
        2.4.2 GSSG/GSH浓度比值对人源溶菌酶复性的影响
        2.4.3 精氨酸浓度对人源溶菌酶复性的影响
        2.4.4 甘油浓度对人源溶菌酶复性的影响
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人溶菌酶的研究进展[J]. 庞恋苏,李亚男.  中华老年口腔医学杂志. 2017(05)
[2]溶菌酶及在钉螺中表达的研究进展[J]. 朱秀安,黄汉韬,杜康,汪安云,赵劲松.  中国血吸虫病防治杂志. 2016(01)
[3]包涵体蛋白体外复性的研究进展[J]. 方敏,黄华樑.  生物工程学报. 2001(06)



本文编号：3715058