梅花鹿MMP-2催化域的克

发布时间：2022-12-10 16:13

　　目的:实现梅花鹿基质金属蛋白酶-2催化域（Catalytic domain of matrix metalloprotease2,cdMMP-2）的体外表达,为进一步研究基质金属蛋白酶-2催化域结构功能及产品开发应用奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从鹿茸cDNA中扩增MMP-2的催化域基因,运用Nde I和Not I克隆位点连入原核表达载体pET30a中,构建原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21中,利用IPTG引导目的蛋白表达,通过使用金属螯合层析技术和柱上复性方法来纯化和复性目的蛋白,利用酶解底物法检测酶的活性。结果:1.重组表达的cdMMP-2 C端带有6×His标签,共有377个氨基酸,预测大小为42.04kD,理论等电点为4.95;2.cdMMP-2转化到感受态细胞BL21中并成功表达cdMMP-2蛋白,优化出最佳IPTG浓度为0.6 mM,最佳诱导时间为5 h;3.经过SDS-聚丙烯酰胺电泳检测和免疫印迹分析,发现目的蛋白主要表达在包涵体中。使用金属螯合层析技术纯化目的蛋白,柱上复性后由SDS-PAGE电泳检测,结果显示目的蛋白单一条带;5.测得蛋白浓度为2.0 mg/m... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
引言
文献综述
实验研究
    第一章 MMP-2催化域基因的扩增和cdMMP-2的构建
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
    第二章 原核表达载体构建及诱导条件优化
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
    第三章 蛋白纯化及复性
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
    第四章 蛋白含量测定及底物酶解实验
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
结论
本文创新点
参考文献
致谢
在学期间主要研究成果
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]MMP-1,2与甲状腺癌现状[J]. 吴小雨,张曼旭,万智恒.  内蒙古医学杂志. 2019(01)
[2]MMP-2及其抑制物TIMP-1在膀胱癌中的表达及意义[J]. 蒋东鹏,曾宪辉,孙轶君,管德辉.  世界最新医学信息文摘. 2019(05)
[3]MMP-2与NF-KB在肺癌侵袭转移中的作用[J]. 刘敏.  实用癌症杂志. 2018(08)
[4]MMP-2/9和Ⅳ型胶原蛋白与胃癌患者胃液芳香族氨基酸浓度变化的关系[J]. 刘健,周丽雅,崔荣丽,金珠,林三仁,张贺军,韩亚京,张颖,尚惠茹,李松茹.  中国微创外科杂志. 2018(06)
[5]鹿产品鉴别的研究进展[J]. 董世武,王磊,周永娜,邢秀梅.  经济动物学报. 2018(04)
[6]重组大肠杆菌表达外源蛋白包涵体复性的研究进展[J]. 牟筱,宗惠,宫皓,杨焱,余四九.  甘肃畜牧兽医. 2018(04)
[7]鹿茸的化学成分及质量控制方法研究进展[J]. 郭晓晗,程显隆,李明华,张文娟,魏锋,马双成.  药物分析杂志. 2018(04)
[8]梅花鹿鹿筋胶原蛋白提取工艺研究[J]. 陈海燕,王华笑,杨傲,张学文,刘悦.  黑龙江畜牧兽医. 2017(19)
[9]酸法和酶法提取牦牛骨胶原蛋白的特性分析[J]. 王晓军,吴婷,贾伟,张春晖,韩玲,余群力.  食品科学. 2018(12)
[10]鹿茸胶原多肽复合酶水解工艺研究[J]. 李冰,李梁,王露露,董思敏,黄宝亮,张晶.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(11)



本文编号：3717079