胰蛋白酶样因子TRYX5在小鼠精子运行到输卵管过程中的功能研究

发布时间：2022-12-17 10:24

　　男性不育在全球广泛分布。我国男性不育发病率高达10%,仅次于心血管疾病和肿瘤。当前,评价男性生殖能力的常用方法是采用CASA系统检测精子的密度,形态,活力等参数,25%不育患者的精子符合以上正常精液参数,这部分病例被命名为不明原因的不育病例（UMI）。在这些病例中,丝氨酸蛋白酶的缺失十分常见。睾丸特异性表达的丝氨酸蛋白酶家族是小鼠睾丸中最大的蛋白酶家族,且很多报道表明,多种丝氨酸蛋白酶对雄性小鼠的生殖能力发挥着必需的作用。有研究发现,属于丝氨酸蛋白酶家族的胰蛋白酶样因子TRYX5特异性表达于小鼠精子顶体,精原细胞系的高尔基体及生精细胞中,但TRYX5的生理功能还鲜有报道。为探讨TRYX5在雄性生殖方面的生理功能,本研究通过建立Tryx5的基因敲除小鼠模型,并通过探究该小鼠雄性生殖方面的表型,及控制这一表型的分子机制,以了解TRYX5影响雄性生殖的分子机理,为探寻可以治疗UMI患者的药物靶标及男性避孕提供理论参考。1.Tryx5在小鼠睾丸等组织的表达规律为进一步探讨Tryx5的表达规律,首先,通过q RT-PCR的方法,检测小鼠不同组织及不同阶段小鼠睾丸中Tryx5 m RNA的表达模式... 

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1.1 雄性生殖系统概述
        1.1.1 睾丸生殖细胞
        1.1.2 支持细胞
        1.1.3 附睾
    1.2 精子在雌性生殖道的运行
        1.2.1 影响精子在子宫中状态的蛋白
        1.2.2 影响精子通过子宫输卵管连接处的因素
        1.2.3 精子在输卵管中的运行
    1.3 精卵识别与融合
    1.4 丝氨酸蛋白酶与雄性生殖
        1.4.1 丝氨酸蛋白酶参与调控小鼠精子发生过程
        1.4.2 丝氨酸蛋白酶参与调控小鼠精子在雌性生殖道中的运行
        1.4.3 丝氨酸蛋白酶参与调控精子穿透明带和精卵融合
    1.5 研究目的和意义
第二章 研究论文 胰蛋白酶样因子TRYX5在雄性小鼠生殖中的功能研究
    前言
    1 试验材料与方法
        1.1 试验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要仪器和试剂
        1.2 试验方法
            1.2.1 q RT-PCR
            1.2.2 兔源多克隆抗体的制备
            1.2.3 蛋白免疫印迹(Western Blotting)
            1.2.4 梯度密度离心法分离小鼠S12-16期长形精子
            1.2.5 睾丸生殖细胞的Hoechst33342 流式细胞分选
            1.2.6 免疫荧光(Immunoflurescence)
            1.2.7 Tryx5-EGFP和 Tryx5 敲除小鼠的制作
            1.2.8 敲除小鼠的表型分析
            1.2.9 蛋白免疫沉淀实验(IP)
            1.2.10 统计分析
    2 试验结果
        2.1 Tryx5 在小鼠中m RNA水平的表达规律
        2.2 TRYX5兔多克隆抗体的制备和蛋白水平的表达规律
            2.2.1 TRYX5兔多克隆抗体的制备
            2.2.2 TRYX5蛋白水平的表达规律
        2.3 Tryx5-EGFP小鼠的制作
        2.4 Tryx5敲除小鼠的制作
        2.5 Tryx5敲除小鼠的表型分析
            2.5.1 繁殖能力检测
            2.5.2 组织形态学分析
            2.5.3 小鼠精子活力
            2.5.4 小鼠精子顶体及顶体反应的检测
            2.5.5 小鼠精子体外受精实验
            2.5.6 小鼠精子自然受精检测
        2.6 表型相关分子机制研究
            2.6.1 精子受精相关分子mRNA水平的检测
            2.6.2 精子受精相关分子ADAM3蛋白水平的检测
            2.6.3 TRYX5 影响S13-16 期长形精子中ADAM3 前体的稳定性或正确定位
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢
攻读博士期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]丝氨酸蛋白酶与生殖[J]. 尚璇,沈春玲,王铸钢.  中国细胞生物学学报. 2016(09)
[2]体外诱导人精子顶体反应方法的比较[J]. 曹翔,刘悦,陈国武,丁之德.  中国男科学杂志. 2010(07)



本文编号：3719759