来源于解酯菌的嗜热耐碱脂肪酶的表达纯化及其酶学性质研究

发布时间：2023-02-07 20:39

　　脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,将来源于解酯嗜热菌(Thermosyntropha lipolytica DSM 11003)的脂肪酶基因(tll2)克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-TLL2,将pET28a-TLL2转入大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行高效表达。通过热处理和镍柱亲和层析得到电泳纯的蛋白TlLip2,对其进行酶学性质表征。结果显示,TlLip2的亚基分子质量为57 ku,比酶活为31 U/mg,最适反应pH及温度分别为8.0和60℃。在60℃以下、pH 6.0～11.0范围内,TlLip2的稳定性较好,相对酶活均维持在60%以上。金属离子K⁺和Na⁺对TlLip2有较大激活作用,而Co²⁺、Zn²⁺、SDS和Tween 80对TlLip2酶活力抑制作用明显。TlLip2在极性小的有机溶剂中具有较好的耐受性。TlLip2对中等碳链长度的对硝基苯酯显示出更高的活性,其中以对硝基苯己酯为底物时,TlLip...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 供试材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 试剂
        1.1.3 培养基
    1.2 试验方法
        1.2.1 Tl Lip2的克隆
        1.2.2 Tl Lip2的诱导表达
        1.2.3 Tl Lip2的分离纯化
        1.2.4 Tl Lip2的酶活力测定方法
        1.2.5 Tl Lip2的酶学性质测定
        1.2.6 油酸乙酯的制备及检测方法
2 结果与分析
    2.1 Tl Lip2的诱导表达及纯化
    2.2 Tl Lip2的酶学性质的测定
        2.2.1 最适温度和温度稳定性
        2.2.2 最适pH和p H稳定性
        2.2.3 金属离子及化学试剂对酶活力的影响
        2.2.4 底物特异性
        2.2.5 有机溶剂耐受性
        2.2.6 动力学参数
    2.3 Tl Lip2催化制备油酸乙酯
        2.3.1 无溶剂体系中制备油酸乙酯
        2.3.2 异辛烷溶剂体系中制备油酸乙酯
3 结论



本文编号：3737391