陆地棉钾转运体基因GhHAK5启动子的克隆与功能分析

发布时间：2023-03-02 18:54

　　KUP/HAK/KT钾转运体基因的转录调控是植物响应低钾胁迫的一项重要机制。克隆和分析棉花钾转运体基因的启动子,不仅有助于了解其表达模式及调控机制,对于改良棉花的钾吸收特性也具有重要意义。陆地棉钾转运体基因GhHAK5是一个在根中特异性高表达的基因,其表达受低钾胁迫诱导,目前关于该基因启动子的功能还不清楚。本研究以陆地棉品种百棉1号为材料,通过PCR方法对GhHAK5上游2000bp启动子片段(pGhHAK5)进行克隆,并通过转化拟南芥、GUS组织定位和低钾诱导表达特性分析来研究其功能。结果表明, pGhHAK5除具有TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个响应于光、逆境胁迫、植物激素和生物钟等的顺式作用元件。pGhHAK5与雷蒙德氏棉pGrHAK5在重要调控元件的数量和位置分布上具有较高的一致性,均具有5个参与根特异性表达调控的元件(ATAAAAT)和1个参与低钾条件下转录调控的ARF转录因子结合位点(TGTCNN)。GUS组织化学染色结果显示,转基因拟南芥幼苗的叶脉和胚轴维管束组织染色较深,根系染色较浅;成熟期转基因拟南芥植株的根、叶脉和花萼维管束组织染色...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 供试材料与植株培养
    1.2 DNA的提取及pGhHAK5扩增
    1.3 序列分析
    1.4 基因表达特性分析
    1.5 载体的构建及农杆菌介导的转化
    1.6 转基因拟南芥植株的筛选和鉴定
    1.7 拟南芥幼苗的低钾处理
    1.8 GUS组织化学染色
2 结果与分析
    2.1 GhHAK5基因启动子的克隆
    2.2 pGhHAK5顺式作用元件预测与分析
    2.3 GhHAK5与其同源基因启动子序列的比较分析
    2.4 转基因拟南芥阳性植株的鉴定
    2.5 pGhHAK5的功能分析
    2.6 低钾胁迫对转pGhHAK5拟南芥幼苗GUS表达的影响
    2.7 GhHAK5基因的时空表达特性分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3752444