寄主因子Hsp70蛋白泛素化修饰在黏质沙雷氏菌Serratia Marcescens-S3诱导抗性中的功能分析

发布时间：2023-03-04 05:22

　　马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是严重危害茄科作物的一种病毒,揭示马铃薯Y病毒与寄主的互作关系将为研究马铃薯Y病毒的致病机理及有效控制提供理论依据。本课题组在前期的工作中从山西烟草根际土壤中分离得到一株对马铃薯Y病毒具有钝化效果的细菌,经16S r RNA及Biolog Micro Plate鉴定为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescen-S3)。通过蛋白质组学及泛素化组学联合分析,初步筛选出Nb Hsc70-2蛋白,推测该蛋白泛素化修饰在Serratia marcescen-S3抗病毒诱导抗性作用机制中可能起重要作用,本研究通过多种生物化学与分子生物学方法,进一步揭示寄主Nb Hsc70-2蛋白的泛素化修饰在黏质沙雷氏菌S3诱导抗性中的作用机理,主要研究结果如下:(1)黏质沙雷氏菌S3是一株具有抗病毒生物活性的细菌菌株,在1.0×10⁹CFU/m L条件下对马铃薯Y病毒抑制作用可达到100%,以S3菌株处理的本氏烟为目标材料,选取了S3防治马铃薯Y病毒最佳反应时间点,通过非标定量技术、高效液相色谱分级技术、泛素化肽段的富集技术以及基...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 植物病毒病害防治现状
    1.2 抗病毒制剂作用机理研究
        1.2.1 抗病毒制剂对寄主的作用
        1.2.2 抗病毒制剂对病毒的作用
    1.3 植物Hsp70热激蛋白研究概况
        1.3.1 植物Hsp70的结构
        1.3.2 Hsp70的功能
        1.3.3 Hsp70与病毒侵染
    1.4 泛素化修饰在抗病毒天然免疫中的作用
        1.4.1 泛素化修饰调控天然免疫信号转导过程
        1.4.2 E3连接酶和病毒蛋白在抗病毒天然免疫信号转导的调控中发挥作用
    1.5 研究内容及意义
第二章 SERRATIA MARCESCENS-S3 发酵液诱导烟草蛋白组学和泛素化组学分析及NBHSC70-2基因克隆
    2.1 材料与方法
        2.1.1 植物材料及培养条件
        2.1.2 供试菌株
        2.1.3 试验方法
    2.2 结果分析
        2.2.1 Serratia Marcescens-S3 发酵液诱导烟草蛋白组学和泛素化组学联合分析
        2.2.2 NbHsc70-2基因克隆与序列分析
        2.2.3 NbHsc70-2组织表达特异性
第三章 NBHSC70-2 对马铃薯Y病毒的促进作用
    3.1 材料与方法
        3.1.1 植物材料与培养条件
        3.1.2 供试毒株及菌株
        3.1.3 载体与质粒
        3.1.4 试验方法
    3.2 结果分析
        3.2.1 PVY侵染对Nb Hsc70-2 的影响
        3.2.2 沉默Nb Hsc70-2对PVY积累量的影响
        3.2.3 过表达Nb Hsc70-2对PVY积累量的影响
第四章 NBHSC70-2 及其泛素化修饰在SERRATIA MARCESCENS-S3诱导烟草获得抗性中的作用分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 植物材料及培养条件
        4.1.2 供试毒株及菌株
        4.1.3 试验方法
    4.2 结果
        4.2.1 验证Nb Hsc70-2在Serratia Marcescens-S3 诱导抗性的作用
        4.2.2 Serratia Marcescens-S3 抑制由PVY诱导产生的Nb Hsc70-2 蛋白的增加
        4.2.3 抑制泛素化修饰导致Serratia Marcescens-S3 抑制的Nb Hsc70-2 蛋白合成失效
第五章 讨论
    5.1 蛋白组学与泛素化组学分析揭示Serratia Marcescens-S3 菌株诱导抗性机制
    5.2 Nb Hsc70-2 促进马铃薯Y病毒的复制侵染
    5.3 NbHsc70-2的泛素化修饰诱导烟草获得抗病毒活性
致谢
参考文献
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本文编号：3753792