A型激酶锚定蛋白2基因表达对生长板软骨细胞功能的影响

发布时间：2023-05-12 21:20

　　目的:探讨A型激酶锚定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表达对生长板软骨细胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及细胞外基质代谢的影响及作用机制。方法:设计AKAP2过表达和基因敲除质粒转染GPCs对AKAP2进行过表达或干扰,构建AKAP2过表达阴性对照组(Vector组)、AKAP2过表达组(AKAP2 OE组)、AKAP2干扰阴性对照组(si-NC组)、AKAP2干扰组(si-AKAP2组)和AKAP2 OE+U0126组[U0126:细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路阻滞剂],记录各组GPCs细胞增殖活力及钙盐沉积情况,检测细胞外基质中Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COLⅡ)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear an...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞来源
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 细胞培养及转染
    1.4 实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative-polymerase chain reaction,qPCR）检测细胞中目标基因表达量
    1.5 MTT检测细胞增殖
    1.6 蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）检测细胞中目标蛋白表达量
    1.7 免疫荧光检测细胞中COLⅡ蛋白表达
    1.8 茜素红染色观察细胞钙盐沉积能力
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 AKAP2过表达对软骨细胞增殖分化的影响
    2.2 AKAP2过表达对软骨细胞ERK1/2磷酸化水平的影响
    2.3 U0126对软骨细胞增殖分化的影响
3 讨论



本文编号：3814655