出芽短梗霉耐盐机制研究

发布时间：2023-05-20 10:42

　　黑酵母(Black Yeast)是一类在细胞壁内外产黑色素的酵母状真菌,是迄今为止发现的最耐盐真核生物之一。黑酵母具有典型的细胞多形性,产黑色素、胞外多糖等特征,但这些因素是否与其高耐盐的特性相关,目前还不清楚,同时具有上述特性的一种黑酵母出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)为研究这个科学问题提供了重要模型。本试验以一株分离于草莓果实的黑酵母:出芽短梗霉NG作为材料,检测在不同盐胁迫条件下的菌体生长状况、细胞分化表型、抗渗透应激积累物质等特征,并通过转录组学探究其耐盐性的分子生物学机制,结论如下:(1)出芽短梗霉通过细胞分化响应NaCl胁迫。盐胁迫条件下细胞分化为膨大细胞抵抗NaCl胁迫并通过多端出芽方式繁殖,在低盐浓度(<9%NaCl)时,细胞可以分化为菌丝体逃离不利环境。在高盐浓度时,细胞向耐盐性更强的膨大细胞、有横膈膜的膨大细胞和分生组织结构分化。(2)出芽短梗霉能通过积累甘油来抵抗高渗透胁迫,甘油积累量与NaCl浓度呈正相关。胞内积累甘油量随培养时间有波动性,波动程度跟NaCl浓度呈线性相关,细胞通过调节甘油积累消耗平衡细胞生长与盐胁迫适应。出芽短...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 酵母盐胁迫信号传导途径
        1.1.1 HOG-MAPK信号途径
        1.1.2 CaN信号途径
        1.1.3 PKA信号途径
    1.2 酵母盐胁迫的分子应答机制
        1.2.1 Na+平衡机制
        1.2.2 渗透平衡机制
    1.3 相容性溶质
        1.3.1 糖类及糖苷类
        1.3.2 醇类
        1.3.3 甜菜碱类
        1.3.4 氨基酸类
    1.4 黑酵母耐盐研究进展
        1.4.1 黑酵母
        1.4.2 黑酵母耐盐研究进展
    1.5 出芽短梗霉的研究进展
        1.5.1 出芽短梗霉概述
        1.5.2 出芽短梗霉的生理代谢产物
        1.5.3 出芽短梗霉的细胞多形性
    1.6 出芽短梗霉耐盐机制研究意义
    1.7 技术路线
第二章 盐胁迫下出芽短梗霉NG的表型特性
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 试验所用菌种、试剂
        2.2.2 培养基配方
        2.2.3 主要仪器与厂家
    2.3 方法
        2.3.1 菌种活化和种子培养
        2.3.2 盐胁迫下菌体生长情况
        2.3.3 盐胁迫下菌落形态特征
        2.3.4 盐胁迫下细胞形态特征
        2.3.5 盐胁迫下细胞微观形态特征
    2.4 结果与分析
        2.4.1 不同盐浓度下出芽短梗霉NG生长情况分析
        2.4.2 不同盐浓度下出芽短梗霉NG菌落生长特征
        2.4.3 不同盐浓度下出芽短梗霉NG细胞形态特征
        2.4.4 不同盐浓度下出芽短梗霉NG细胞超微形态
    2.5 小结
第三章 出芽短梗霉NG抗渗透应激机制
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 试验所用菌种、试剂
        3.2.2 培养基和灭菌条件
        3.2.3 主要仪器与厂家
    3.3 方法
        3.3.1 菌体培养与收集
        3.3.2 菌体干重测定
        3.3.3 甘油HPLC检测方法
        3.3.4 海藻糖HPLC检测方法
        3.3.5 统计学处理
    3.4 结果与分析
        3.4.1 菌体生物量
        3.4.2 甘油标准曲线
        3.4.3 胞内甘油含量分析
        3.4.4 胞内甘油动态变化含量
        3.4.5 胞内海藻糖HPLC检测分析
    3.5 小结
第四章 盐胁迫条件下出芽短梗霉NG的转录组测序与分析
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 试验所用菌种、试剂
        4.2.2 培养基和灭菌条件
        4.2.3 主要仪器与厂家
    4.3 方法
        4.3.1 菌种活化和种子培养
        4.3.2 菌体的培养与收集
        4.3.3 总RNA提取和核酸质量检测
        4.3.4 转录组测序文库构建
        4.3.5 转录本组装
        4.3.6 转录组数据分析流程
    4.4 结果与分析
        4.4.1 转录组测序
        4.4.2 转录本组装
        4.4.3 基因功能注释
        4.4.4 差异基因分析
        4.4.5 耐Na Cl胁迫相关差异基因分析
        4.4.6 甘油合成相关差异表达基因
    4.5 小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表文章



本文编号：3820969