CRISPR/Cas9介导的荔枝霜疫霉基因组编辑系统的建立

发布时间：2023-06-18 02:01

　　参考大豆疫霉的CRISPR/Cas9基因组编辑技术体系,针对荔枝霜疫霉RXLR效应蛋白编码基因Pl Avh133设计了20 bp的sgRNA靶向序列,结合同源替换的方式对该基因进行敲除。利用聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化,共获得了58个具有G418抗性的转化子,通过PCR和测序分析证明其中5个转化子的Pl Avh133基因被敲除,敲除效率约为8.6%。荧光定量PCR分析证实Pl Avh133敲除突变体中该基因不表达。本研究结果为荔枝霜疫霉的基因功能研究提供了重要的技术基础。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 供试菌株
    1.2 供试培养基及试剂
    1.3 载体及其构建
    1.4 PEG介导的原生质体转化
        1.4.1 菌丝收集
        1.4.2 原生质体制备
        1.4.3 转化
    1.5 转化子的验证
        1.5.1 PCR验证
        1.5.2 荧光定量PCR验证
2 结果与分析
    2.1 荔枝霜疫霉对遗传霉素(G418)的敏感性
    2.2 荔枝霜疫霉原生质体酶解条件分析
    2.3 Pl Avh133的序列特征
    2.4 sgRNA靶向序列的设计
    2.5 CRISPR/Cas9敲除策略
    2.6 基因敲除及结果验证
3 讨论



本文编号：3834559