芸薹属异源三倍体（ABC）的分子细胞遗传学研究
发布时间：2023-09-14 00:04
种间杂交和异源多倍体化给远缘植物物种之间的基因交换、遗传性状变异以及新种质资源的创建提供了一个重要途径。芸薹属三个二倍体基本种(甘蓝、白菜、黑芥)之间通过两两杂交的方式,获得了甘蓝型油菜、芥菜型油菜、埃塞俄比亚芥菜等一系列丰富种质资源,极大丰富了蔬菜、油料等经济作物资源库。目前,人工合成的芸薹属异源多倍体成为研究芸薹属之间遗传重组和稳定性的优秀模式材料,但对三基因组单倍型材料的研究报道较少。因此,在本研究中,使用异源四倍体种埃塞俄比亚芥菜(BBCC)作为母本,同源二倍体种白菜(AA)作为父本,通过人工杂交,成功创制出芸薹属异源三倍体新杂交种ABC。对异源三倍体及其亲本的表型特征进行观察统计;对比异源三倍体杂交种及亲本的减数分裂过程;通过免疫荧光染色技术,研究其减数分裂过程中调控联会复合体形成的特异蛋白ZYP1的表达情况;通过免疫荧光定位技术研究其减数分裂过程中细胞骨架的动态定位情况;利用基因组原位杂交研究异源三倍体杂交种的染色体分别在基因组内和组间的配对现象;利用石蜡切片技术研究杂交种与亲本的花药发育情况;利用荧光定量PCR对7个调控减数分裂过程的基因,以及2个调控花药发育的重要基因,...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 芸薹属植物远缘杂交研究进展
1.1.1 芸薹属远缘杂交不亲和性的机理
1.1.2 克服远缘杂交不亲和性的方法
1.1.3 远缘杂交中常见的染色体特殊行为
1.2 芸薹属A,B,C三基因组研究进展
1.3 人工合成多倍体杂交材料细胞学研究进展
1.3.1 流式倍性细胞鉴定术研究进展
1.3.2 免疫荧光研究进展
1.3.3 原位杂交研究进展
1.4 减数分裂研究进展
1.4.1 减数分裂过程及意义
1.4.2 减数分裂调控机制研究进展
1.4.3 联会复合体的研究进展
1.5 异源多倍体与同源多倍体减数分裂调控的研究进展
1.6 植物花药与花粉发育的研究进展
1.7 研究目的及意义
2 异源三倍体杂种的材料鉴定与性状分析
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 杂交种获得与植株鉴定
2.2.2 形态学观察
2.2.3 气孔观察
2.2.4 花粉育性鉴定
2.3 实验结果与分析
2.3.1 异源三倍体杂种的形态学特征
2.3.2 花粉育性鉴定
2.3.3 异源三倍体气孔观察
2.4 讨论
3.异源三倍体杂种减数分裂过程观察
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 鉴定减数分裂时期的取材范围
3.2.2 减数分裂时期分裂相细胞的染色体制片
3.2.3 联会复合体调控蛋白ZYP1抗体在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.2.4 异源三倍体杂种的基因组原位荧光杂交
3.2.5 细胞骨架β-tubulin微管蛋白在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.3 结果与分析
3.3.1 减数分裂时期取材范围
3.3.2 减数分裂时期细胞学鉴定
3.3.3 联会复合体调控蛋白ZYP1抗体在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.3.4 异源三倍体杂种的基因组原位荧光杂交
3.3.5 细胞骨架β-tubulin微管蛋白在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.4 讨论
4.异源三倍体花药发育过程观察
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 成熟花药与柱头的扫描电镜观察
4.2.2 成熟花粉粒的扫描电镜观察
4.2.3 花药不同发育时期的石蜡切片
4.3 实验结果
4.3.1 成熟花药与柱头的扫描电镜观察结果
4.3.2 成熟花粉粒的扫描电镜观察
4.3.3 花药不同发育时期的石蜡切片观察结果
4.4 讨论
5 异源三倍体中调控减数分裂与花药发育的关键基因表达量分析
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 减数分裂调控基因、花药发育调控基因以及内参基因的选取和引物设计
5.2.2 提取检测RNA
5.2.3 RNA反转录
5.2.4 实时定量荧光PCR测定
5.3 结果与分析
5.3.1 总RNA的质量与浓度
5.3.2 异源三倍体中涉及减数分裂及花药发育几个关键基因表达量变化分析
5.4 讨论
结论与展望
参考文献
附录一：本实验所用主要仪器设备
个人简介
致谢
本文编号：3846162
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 芸薹属植物远缘杂交研究进展
1.1.1 芸薹属远缘杂交不亲和性的机理
1.1.2 克服远缘杂交不亲和性的方法
1.1.3 远缘杂交中常见的染色体特殊行为
1.2 芸薹属A,B,C三基因组研究进展
1.3 人工合成多倍体杂交材料细胞学研究进展
1.3.1 流式倍性细胞鉴定术研究进展
1.3.2 免疫荧光研究进展
1.3.3 原位杂交研究进展
1.4 减数分裂研究进展
1.4.1 减数分裂过程及意义
1.4.2 减数分裂调控机制研究进展
1.4.3 联会复合体的研究进展
1.5 异源多倍体与同源多倍体减数分裂调控的研究进展
1.6 植物花药与花粉发育的研究进展
1.7 研究目的及意义
2 异源三倍体杂种的材料鉴定与性状分析
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 杂交种获得与植株鉴定
2.2.2 形态学观察
2.2.3 气孔观察
2.2.4 花粉育性鉴定
2.3 实验结果与分析
2.3.1 异源三倍体杂种的形态学特征
2.3.2 花粉育性鉴定
2.3.3 异源三倍体气孔观察
2.4 讨论
3.异源三倍体杂种减数分裂过程观察
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 鉴定减数分裂时期的取材范围
3.2.2 减数分裂时期分裂相细胞的染色体制片
3.2.3 联会复合体调控蛋白ZYP1抗体在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.2.4 异源三倍体杂种的基因组原位荧光杂交
3.2.5 细胞骨架β-tubulin微管蛋白在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.3 结果与分析
3.3.1 减数分裂时期取材范围
3.3.2 减数分裂时期细胞学鉴定
3.3.3 联会复合体调控蛋白ZYP1抗体在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.3.4 异源三倍体杂种的基因组原位荧光杂交
3.3.5 细胞骨架β-tubulin微管蛋白在异源三倍体杂交种中的免疫定位
3.4 讨论
4.异源三倍体花药发育过程观察
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 成熟花药与柱头的扫描电镜观察
4.2.2 成熟花粉粒的扫描电镜观察
4.2.3 花药不同发育时期的石蜡切片
4.3 实验结果
4.3.1 成熟花药与柱头的扫描电镜观察结果
4.3.2 成熟花粉粒的扫描电镜观察
4.3.3 花药不同发育时期的石蜡切片观察结果
4.4 讨论
5 异源三倍体中调控减数分裂与花药发育的关键基因表达量分析
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 减数分裂调控基因、花药发育调控基因以及内参基因的选取和引物设计
5.2.2 提取检测RNA
5.2.3 RNA反转录
5.2.4 实时定量荧光PCR测定
5.3 结果与分析
5.3.1 总RNA的质量与浓度
5.3.2 异源三倍体中涉及减数分裂及花药发育几个关键基因表达量变化分析
5.4 讨论
结论与展望
参考文献
附录一：本实验所用主要仪器设备
个人简介
致谢
本文编号：3846162
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