CP24介导转录因子St904调控叶绿素积累
发布时间：2023-10-03 21:45
光照周期是影响植物的生长发育的重要环境因子,以往研究已识别并特化了部分光照周期响应成花基因;光合作用同样受到光照影响,尽管有众多研究识别了 PSⅠ和PSⅡ组成蛋白,如CP24和CSS等,但这些蛋白表达的上游调控基因有哪些、它们如何响应光照周期调控光合作用却有待确定。本实验室前期研究识别了马铃薯光照响应基因St904(DMG400033904),依据其氨基酸序列组成,基因组注释预测St904属于单MYB转录因子家族;文献和基因组数据库检索,未见St904及其同源物功能的研究报道。依据St904 cDNA序列,本研究运用重组基因设计和合成、体内转化、过量和抑制表达及其表型测定、相关基因表达测定和凝胶电泳迁移(EMSA,electrophoretic mobility shift assay)等方法,确定了St904参与形成的表型及其形成原因。主要结果如下:1.合成35S-St904和His-St904基因cDNA,亚克隆35S-St904获得重组载体后,转化农杆菌GV3101,筛选获得旨在体内过量和抑制St904表达的阳性重组根癌农杆菌菌株GV3101-pC-35S-St904+/-和 G...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表（Abbreviation Table)
第一章 文献综述
1.1 光照周期响应基因及其成花功能
1.2 叶绿素代谢及其对光照的响应
1.2.1 叶绿素代谢
1.2.2 光照周期调控叶绿素积累
1.2.3 光照调控叶绿素结合蛋白积累
1.3 光照周期响应转录因子St904
1.4 单MYB转录因子及其功能
1.4.1 MYB基因家族及其功能
1.4.2 单MYB转录因子的研究进展
1.5 研究目的及内容
1.5.1 研究目的
1.5.2 课题研究内容
第二章 St904基因表达载体的构建
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 菌种和质粒
2.2.2 引物序列
2.2.3 实验试剂
2.2.4 主要设备及仪器
2.2.5 实验相关培养基
2.3 实验方法
2.3.1 St904 cDNA的生物学信息分析
2.3.2 St904 cDNA的获得
2.3.3 St904基因亚克隆
2.3.4 His-St904基因表达载体的构建
2.4 结果与分析
2.4.1 St904是马铃薯MYB家族中保守的成员
2.4.2 St904基因核酸序列合成及测序
2.4.3 过量和抑制表达载体的构建
2.4.4 His-St904基因表达载体的构建
2.5 讨论
2.6 本章小结
第三章 St904体内转化及表达
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 植物材料
3.2.2 菌种和质粒
3.2.3 实验试剂
3.2.4 主要设备及仪器
3.2.5 实验相关培养基
3.2.6 实验常用溶液
3.3 实验方法
3.3.1 重组质粒转化根癌农杆菌
3.3.2 马铃薯St904基因的遗传转化
3.3.3 转化株系的阳性鉴定
3.4 结果与分析
3.4.1 根癌农杆菌的转化及鉴定
3.4.2 目的基因的遗传转化
3.5 讨论
3.6 本章小结
第四章 St904抑制和过量表达决定的生理表型
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 植物材料
4.2.2 主要设备及仪器
4.2.3 实验常用溶液
4.3 实验方法
4.3.1 过量和抑制St904表达的RT-qPCR
4.3.2 表型观察
4.3.3 过量和抑制St904表达阳性株系叶片叶绿素含量测定
4.4 结果与分析
4.4.1 过量和抑制St904表达的RT-qPCR
4.4.2 St904基因阳性转化株系形态表型观察
4.4.3 过量和抑制St904表达阳性株系叶片叶绿素含量的测定
4.5 讨论
4.6 本章小结
第五章 St904参与调控的基因识别
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验菌株及质粒
5.2.2 引物设计及合成
5.2.3 工具酶和生化试剂
5.2.4 实验仪器及设备
5.2.5 实验所用培养基
5.2.6 实验相关溶液
5.3 实验方法
5.3.1 叶绿素代谢相关基因的筛选
5.3.2 重组载体pCzn1-904和pET-22b(+)-904的构建及转化
5.3.3 目的基因的原核表达纯化与Westemblot分析
5.3.4 DNA探针制备
5.3.5 目的蛋白与DNA探针结合反应
5.3.6 EMSA检测反应
5.4 结果与分析
5.4.1 叶绿素代谢相关基因的筛选
5.4.2 原核表达载体pCzn1-904和pET-22b(+)-904的构建及鉴定
5.4.3 原核产物的表达
5.4.4 融合蛋白的纯化和Westernblot分析
5.4.5 EMSA试验验证CP24和CSS启动子与St904基因相结合
5.5 讨论
5.6 本章小结
第六章 结论
参考文献
致谢
附录
个人简历
本文编号：3850704
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表（Abbreviation Table)
第一章 文献综述
1.1 光照周期响应基因及其成花功能
1.2 叶绿素代谢及其对光照的响应
1.2.1 叶绿素代谢
1.2.2 光照周期调控叶绿素积累
1.2.3 光照调控叶绿素结合蛋白积累
1.3 光照周期响应转录因子St904
1.4 单MYB转录因子及其功能
1.4.1 MYB基因家族及其功能
1.4.2 单MYB转录因子的研究进展
1.5 研究目的及内容
1.5.1 研究目的
1.5.2 课题研究内容
第二章 St904基因表达载体的构建
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 菌种和质粒
2.2.2 引物序列
2.2.3 实验试剂
2.2.4 主要设备及仪器
2.2.5 实验相关培养基
2.3 实验方法
2.3.1 St904 cDNA的生物学信息分析
2.3.2 St904 cDNA的获得
2.3.3 St904基因亚克隆
2.3.4 His-St904基因表达载体的构建
2.4 结果与分析
2.4.1 St904是马铃薯MYB家族中保守的成员
2.4.2 St904基因核酸序列合成及测序
2.4.3 过量和抑制表达载体的构建
2.4.4 His-St904基因表达载体的构建
2.5 讨论
2.6 本章小结
第三章 St904体内转化及表达
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 植物材料
3.2.2 菌种和质粒
3.2.3 实验试剂
3.2.4 主要设备及仪器
3.2.5 实验相关培养基
3.2.6 实验常用溶液
3.3 实验方法
3.3.1 重组质粒转化根癌农杆菌
3.3.2 马铃薯St904基因的遗传转化
3.3.3 转化株系的阳性鉴定
3.4 结果与分析
3.4.1 根癌农杆菌的转化及鉴定
3.4.2 目的基因的遗传转化
3.5 讨论
3.6 本章小结
第四章 St904抑制和过量表达决定的生理表型
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 植物材料
4.2.2 主要设备及仪器
4.2.3 实验常用溶液
4.3 实验方法
4.3.1 过量和抑制St904表达的RT-qPCR
4.3.2 表型观察
4.3.3 过量和抑制St904表达阳性株系叶片叶绿素含量测定
4.4 结果与分析
4.4.1 过量和抑制St904表达的RT-qPCR
4.4.2 St904基因阳性转化株系形态表型观察
4.4.3 过量和抑制St904表达阳性株系叶片叶绿素含量的测定
4.5 讨论
4.6 本章小结
第五章 St904参与调控的基因识别
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验菌株及质粒
5.2.2 引物设计及合成
5.2.3 工具酶和生化试剂
5.2.4 实验仪器及设备
5.2.5 实验所用培养基
5.2.6 实验相关溶液
5.3 实验方法
5.3.1 叶绿素代谢相关基因的筛选
5.3.2 重组载体pCzn1-904和pET-22b(+)-904的构建及转化
5.3.3 目的基因的原核表达纯化与Westemblot分析
5.3.4 DNA探针制备
5.3.5 目的蛋白与DNA探针结合反应
5.3.6 EMSA检测反应
5.4 结果与分析
5.4.1 叶绿素代谢相关基因的筛选
5.4.2 原核表达载体pCzn1-904和pET-22b(+)-904的构建及鉴定
5.4.3 原核产物的表达
5.4.4 融合蛋白的纯化和Westernblot分析
5.4.5 EMSA试验验证CP24和CSS启动子与St904基因相结合
5.5 讨论
5.6 本章小结
第六章 结论
参考文献
致谢
附录
个人简历
本文编号：3850704
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