菠萝AcPIP1∶2基因的克隆和重组载体的构建

发布时间：2023-11-07 19:55

　　构建菠萝(Ananas comosus(Linn.) Merr.)质膜水通道蛋白基因(AcPIP1∶2)原核表达载体和体外转录载体,为制备AcPIP1∶2抗体和含有Poly(A)+的AcPIP1∶2转录子奠定基础.以菠萝果实为试验材料,提取总RNA并反转录成cDNA.以cDNA为模板,根据GenBank中公布的AcPIP1∶2全长cDNA序列(登录号:XM₀20229679.1)设计合成特异性引物进行PCR扩增,获得AcPIP1∶2开放阅读框(ORF)序列.序列分析表明,获得的AcPIP1∶2序列与GenBank中公布的序列一致,序列长度为867 bp.该序列经Hind III和Xho I双酶切后亚克隆至原核表达载体pET32a(+),酶切、测序表明,成功构建了重组载体pET32a(+)-AcPIP1∶2.将pET32a(+)-AcPIP1∶2转到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中表达,结果表明,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生分子量为50 ku的融合蛋白.该序列经Hind III和Xba I双酶切后亚克隆至载体pSP64 Poly(A)中,酶切、测序表明...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
2 结果与分析
    2.1 菠萝果实总RNA质量的检测
    2.2 AcPIP1-2 ORF序列的扩增
    2.3 AcPIP1∶2 ORF的测序及序列分析
    2.4 原核表达载体pET32a(+)-AcPIP1∶2的构建
    2.5 原核表达及鉴定
    2.6 AcPIP1∶2的非洲爪蟾卵母细胞表达载体的构建
3 结论



本文编号：3861349