跨膜蛋白PAN-1对于线虫发育的影响

发布时间：2023-11-18 11:55

　　PAN-1是一个结构相对简单的蛋白,除了主要的LRR结构域(leucine-rich repeat domain)之外,主要还有一个跨膜结构域。LRR结构域决定了PAN-1的功能,而跨膜结构域决定了PAN-1的定位。为了探究PAN-1的亚细胞定位,我通过DLG-1::RFP来标记seam cell与表皮的连接处,间接的标记seam cell细胞膜。通过共聚焦显微镜发现,PAN-1与DLG-1并不完全共定位,而是存在于seam cell的细胞膜上,并且在seam cell膜上的分布受细胞极性的影响。MYRF-1作为重要的转录因子,参与秀丽隐杆线虫的发育调控,与PAN-1一样定位于细胞膜上。先前实验我们发现PAN-1能够协助MYRF-1行使自身功能。为了进一步了解PAN-1是如何协助MYRF-1行使功能的,我通过构建不同的截短突变体,共转染至HEK293-T细胞,后续免疫共沉淀发现PAN-1的LRR结构域与MYRF-1的C2结构域之间存在着互作。同时当MYRF-1缺失跨膜结构域后即使存在C2结构域也无法与PAN-1互作,这说明两者的互作是在两个蛋白正确的定位于细胞膜上的基础上而存在的。pa...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstracts
1 引言
    1.1 MYRF是发育所必需的
    1.2 MYRF-1的剪切
    1.3 PAN-1
    1.4 突触重塑
    1.5 seam cell
    1.6 表皮与蜕皮
2 实验内容与设计
    2.1 PAN-1的细胞膜定位
    2.2 验证在HEK293-T细胞系中PAN-1 能否与MYRF-1 互作
    2.3 PAN-1与MYRF-1 的互作模式的探究
    2.4 PAN-1对于秀丽隐杆线虫发育的影响
        2.4.1 pan-1对于秀丽隐杆线虫D型神经元突触重塑的影响
        2.4.2 pan-1对于秀丽隐杆线虫表皮的影响
        2.4.3 pan-1 对于seam cell分裂的影响
        2.4.4 pan-1对于肠道的影响
3 实验材料与方法
    3.1 实验材料
    3.2 实验试剂与配方
        3.2.1 NGM培养基配方及配置
        3.2.2 线虫冻存液配方及配制
        3.2.3 线虫培养的盐溶液
        3.2.4 LB液体培养基、LB板配制
        3.2.5 PCR相关溶液配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 同步化
        3.3.2 显微注射
        3.3.3 免疫共沉淀(Co-IP)
        3.3.4 CRISPR-Cas9 编辑pan-1^LoxP等位基因
4 实验结果
    4.1 PAN-1的定位
    4.2 PAN-1 能与MYRF-1 互作
    4.3 PAN-1与MYRF-1 互作结构域的分析
    4.4 PAN-1对于线虫发育的影响
        4.4.1 PAN-1调控D型运动神经元的突触重塑
        4.4.2 表皮缺失PAN-1导致蜕皮异常
        4.4.3 seam cell中特异性敲低PAN-1 对于线虫的影响
        4.4.4 肠道特异性敲低PAN-1对于线虫的影响
5 实验总结及讨论
    5.1 实验总结
    5.2 讨论
参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3865236