硼酸功能化磁性材料的制备及特异性分离糖蛋白的应用研究

发布时间：2023-12-26 18:20

　　作为蛋白质重要的翻译后修饰之一,蛋白质的糖基化广泛存在于超过50%的蛋白质中,影响着蛋白质的结构和功能,不仅在细胞重要的生命过程中起着调控作用,而且某些疾病发生与发展的生理过程也与蛋白质糖基化相关,是许多临床生物标志物及治疗的靶标,因此糖蛋白的研究具有重要的生物学意义及临床价值。然而其在生物样本中的低丰度性,糖链的微观不均一性,导致了糖蛋白的分离富集成为研究的重要前提。目前,针对糖蛋白的分离富集方法报道的有很多,其中将苯硼酸作为亲和配体搭载于磁性纳米材料表面的方法得到了广泛的应用。但是现有的苯硼酸功能化磁性材料应用中也存在一些问题,如结合后的目标蛋白需在酸性条件下洗脱,但是酸洗脱条件存在不一致性,且过酸的条件也会对糖蛋白结构造成一定的影响,另一方面对酸敏感的材料也会受到应用限制,另外酸洗脱共沉淀下来的非糖蛋白,对后续实验会造成时间与经济上的浪费。为解决以上问题,本研究首先对磁性纳米材料进行碳质包覆,一方面提高了材料的亲水性来对抗非特异性吸附的问题,另一方面为进一步修饰提供了活性位点。然后制备了以二硫键连接的苯硼酸功能化磁性材料Fe₃O₄@C-...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1.引言
    1.1 糖基化蛋白质组学简介
        1.1.1 糖蛋白的类型及作用
        1.1.2 生物质谱技术在糖蛋白研究中的应用
    1.2 糖蛋白、糖肽的富集分离技术
        1.2.1 非共价键连接法
        1.2.2 化学反应形成共价键连接法
    1.3 可断裂连接器在生物分子分离方面的应用
        1.3.1 酶可分裂的连接器
        1.3.2 还原敏感性连接器
        1.3.3 可光解的连接器
        1.3.4 酸敏感的连接器
    1.4 磁性纳米材料在蛋白质分离中的应用
        1.4.1 对磷酸化蛋白质的富集
        1.4.2 对糖蛋白的分离富集
    1.5 本论文研究内容及意义
2.两种硼酸功能化磁性材料的制备
    2.1 实验部分
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 Fe₃O₄ MNPs的合成
        2.1.4 两种硼酸功能化修饰的Fe₃O₄ MNPs的制备
    2.2 测试与表征
        2.2.1 透射电子显微镜(TEM)
        2.2.2 粒径及Zeta电位测试
        2.2.3 磁强度检测
        2.2.4 水分散性及磁响应的考察
        2.2.5 傅里叶变换红外光谱(FTIR)测定
        2.2.6 热失重分析(TGA)
        2.2.7 X射线光电子能谱测定(XPS)
        2.2.8 紫外-可见分光光计(UV-Vis)的应用
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 TEM结果分析
        2.3.2 磁强度检测结果
        2.3.3 水分散性及磁响应性结果
        2.3.4 粒径及Zeta电位测定结果
        2.3.5 FTIR结果分析
        2.3.6 TGA分析结果
        2.3.7 XPS结果分析
        2.3.8 紫外-可见分光光计(UV-Vis)的结果分析
    2.4 本章小结
3.硼酸功能化磁性材料特异性分离糖蛋白的应用
    3.1 实验部分
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 两种硼酸功能化材料对糖蛋白的吸附性能测定
        3.1.4 对吸附的糖蛋白进行断键释放性能测定
        3.1.5 硼酸功能化磁性材料对鸡蛋清中糖蛋白的分离应用
        3.1.6 硼酸功能化磁性材料对人血清中糖蛋白的分离应用
    3.2 实验结果与分析
        3.2.1 对糖蛋白吸附性能的测定结果分析
        3.2.2 对吸附的糖蛋白断键释放性能测定的结果分析
        3.2.3 鸡蛋清中糖蛋白的分离应用结果分析
        3.2.4 人血清中糖蛋白的分离应用结果分析
    3.3 本章小结
4.总结与展望
参考文献
致谢



本文编号：3875283