异沙叶蝉与小麦黄条纹病毒互作及内生呼肠孤新病毒的鉴定
发布时间：2024-01-01 07:34
异沙叶蝉是一种重要的农业害虫,其寄主广泛,并可通过取食植物汁液传播小麦矮缩病毒和一种新型弹状病毒-小麦黄条纹病毒(wheat yellow striate alphanucleorhabdovirus,WYSV)。切断异沙叶蝉对病毒的传播是防治病毒病害最行之有效的方法之一,而阐明异沙叶蝉与病毒的互作机制是明确传毒机制的关键。因此本研究以异沙叶蝉及其传播的WYSV为研究对象,筛选异沙叶蝉体内与传播WYSV相关的介体蛋白并解析其功能,为阻断以异沙叶蝉传播植物弹状病毒提供新的位点靶标。本研究首先利用RNA-seq技术分析了携带WYSV的异沙叶蝉转录本,与健康对照组相比,共鉴定出2896个差异表达基因,其中745个为上调表达基因,2151个为下调表达基因。GO功能注释表明这些基因参与了几丁质代谢、糖代谢以及囊泡运输等多种生物学过程。进一步利用WYSV G蛋白抗体通过免疫共沉淀(CO-IP)实验,结合质谱分析的方法从异沙叶蝉体内共筛选到20种候选蛋白,包括膜组分的跨膜蛋白5,参与胞吐的Exocyst复合成分1(SEC3),参与神经传输的乙酰胆碱受体(Acetylcholine receptor ...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 介体昆虫传播植物病毒机制的研究
1.1.1 非持久性和半持久性病毒的传毒机制研究
1.1.2 持久性病毒的传毒机制研究
1.2 弹状病毒研究进展
1.2.1 植物弹状病毒分类
1.2.2 弹状病毒基因组结构及蛋白功能
1.2.3 弹状病毒传毒机制
1.2.4 小麦黄条纹病毒研究进展
1.3 昆虫特异性病毒研究进展
1.3.1 昆虫特异性病毒概况
1.3.2 昆虫特异性病毒的检测技术
1.3.3 昆虫特异性病毒的应用
1.4 呼肠孤病毒研究进展
1.4.1 呼肠孤病毒简介
1.4.2 呼肠孤病毒基因组结构及组装运输
1.5 病毒与介体互作的研究方法
1.5.1 转录组分析
1.5.2 分离泛素酵母双杂交系统
1.5.3 免疫共沉淀(CO-IP)
1.6 本研究目的意义及技术路线
第二章 筛选鉴定异沙叶蝉体内与WYSV-G蛋白互作的蛋白质
2.1 材料与方法
2.1.1 传毒介体昆虫与植物材料
2.1.2 实验所用试剂
2.1.3 转录组测序分析样品的制备
2.1.4 转录组数据分析及RT-qPCR验证
2.1.5 免疫共沉淀及质谱分析
2.1.6 候选蛋白分析
2.2 结果与分析
2.2.1 转录组测序分析异沙叶蝉体内与WYSV互作的蛋白质
2.2.2 免疫共沉淀结合质谱技术筛选与WYSV互作的蛋白质
2.3 总结与讨论
第三章 WYSV-G与异沙叶蝉SEC3和ARSA1两种候选蛋白的互作验证
3.1 材料与方法
3.1.1 实验所用主要试剂及仪器
3.1.2 目的基因克隆
3.1.3 诱饵载体和猎物载体构建
3.1.4 诱饵载体功能验证
3.1.5 酵母双杂交及β-galactosidase验证SEC3,ARSA1与WYSV G互作
3.2 结果与分析
3.2.1 目的基因的克隆
3.2.2 诱饵载体和猎物载体构建
3.2.3 诱饵载体功能验证结果
3.2.4 酵母双杂交及β-galactosidase验证SEC3,ARSA1与WYSV G互作
3.3 总结与讨论
第四章 异沙叶蝉内生呼肠孤新病毒PARV鉴定及验证
4.1 材料与方法
4.1.1 昆虫收集与饲养
4.1.2 主要试剂及仪器
4.1.3 透射电镜样品制备
4.1.4 双链RNA的提取方法
4.1.5 转录组测序和序列组装
4.1.6 RACE扩增获得病毒全基因组
4.1.7 生物信息学分析病毒基因组特征
4.1.8 RT-PCR
4.2 结果与分析
4.2.1 透射电镜发现异沙叶蝉共生新病毒
4.2.2 异沙叶蝉呼肠孤病毒的全基因组结构及序列特性
4.2.3 病毒dsRNA的提取分析
4.2.4 PARV系统发育进化分析
4.2.5 WYSV与 PARV在异沙叶蝉体内的复合侵染
4.3 总结与讨论
第五章 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3876357
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 介体昆虫传播植物病毒机制的研究
1.1.1 非持久性和半持久性病毒的传毒机制研究
1.1.2 持久性病毒的传毒机制研究
1.2 弹状病毒研究进展
1.2.1 植物弹状病毒分类
1.2.2 弹状病毒基因组结构及蛋白功能
1.2.3 弹状病毒传毒机制
1.2.4 小麦黄条纹病毒研究进展
1.3 昆虫特异性病毒研究进展
1.3.1 昆虫特异性病毒概况
1.3.2 昆虫特异性病毒的检测技术
1.3.3 昆虫特异性病毒的应用
1.4 呼肠孤病毒研究进展
1.4.1 呼肠孤病毒简介
1.4.2 呼肠孤病毒基因组结构及组装运输
1.5 病毒与介体互作的研究方法
1.5.1 转录组分析
1.5.2 分离泛素酵母双杂交系统
1.5.3 免疫共沉淀(CO-IP)
1.6 本研究目的意义及技术路线
第二章 筛选鉴定异沙叶蝉体内与WYSV-G蛋白互作的蛋白质
2.1 材料与方法
2.1.1 传毒介体昆虫与植物材料
2.1.2 实验所用试剂
2.1.3 转录组测序分析样品的制备
2.1.4 转录组数据分析及RT-qPCR验证
2.1.5 免疫共沉淀及质谱分析
2.1.6 候选蛋白分析
2.2 结果与分析
2.2.1 转录组测序分析异沙叶蝉体内与WYSV互作的蛋白质
2.2.2 免疫共沉淀结合质谱技术筛选与WYSV互作的蛋白质
2.3 总结与讨论
第三章 WYSV-G与异沙叶蝉SEC3和ARSA1两种候选蛋白的互作验证
3.1 材料与方法
3.1.1 实验所用主要试剂及仪器
3.1.2 目的基因克隆
3.1.3 诱饵载体和猎物载体构建
3.1.4 诱饵载体功能验证
3.1.5 酵母双杂交及β-galactosidase验证SEC3,ARSA1与WYSV G互作
3.2 结果与分析
3.2.1 目的基因的克隆
3.2.2 诱饵载体和猎物载体构建
3.2.3 诱饵载体功能验证结果
3.2.4 酵母双杂交及β-galactosidase验证SEC3,ARSA1与WYSV G互作
3.3 总结与讨论
第四章 异沙叶蝉内生呼肠孤新病毒PARV鉴定及验证
4.1 材料与方法
4.1.1 昆虫收集与饲养
4.1.2 主要试剂及仪器
4.1.3 透射电镜样品制备
4.1.4 双链RNA的提取方法
4.1.5 转录组测序和序列组装
4.1.6 RACE扩增获得病毒全基因组
4.1.7 生物信息学分析病毒基因组特征
4.1.8 RT-PCR
4.2 结果与分析
4.2.1 透射电镜发现异沙叶蝉共生新病毒
4.2.2 异沙叶蝉呼肠孤病毒的全基因组结构及序列特性
4.2.3 病毒dsRNA的提取分析
4.2.4 PARV系统发育进化分析
4.2.5 WYSV与 PARV在异沙叶蝉体内的复合侵染
4.3 总结与讨论
第五章 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3876357
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