利用TALEN系统对兔进行Tiki1基因敲除

发布时间：2024-01-31 04:09

　　【目的】利用转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)系统获得Tiki1基因敲除的兔模型,为研究Tiki1对动物早期发育作用机理提供兔源的动物模型。【方法】基于TALEN系统设计了靶向兔Tiki1基因的打靶载体,分别将10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞质中,然后收集发育至囊胚期的胚胎,鉴定囊胚率和基因修饰效率,通过测序检验囊胚的基因突变。为了进一步获得Tiki1基因敲除兔,后续将50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17个原核期的家兔受精卵胞质中,将受精卵分别移植到2只受体兔体内。【结果】注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(64%)与注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(57%)差异不大,但注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(100%)显著高于注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(14.3%)。测序结果表明,Tiki1基因的突变范围从1到28 bp缺失不等。经过胚胎移植共生出...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料和试剂
    1.2 TALEN质粒设计与构建
        1.2.1 TALEN质粒设计
        1.2.2 TALEN的合成与组装
        1.2.3 转化
        1.2.4 体外转录
        1.2.5 RNA加尾修饰
        1.2.6 RNA产物回收
        1.2.7 TALEN的打靶效率检测
    1.3 兔受精卵的显微注射
        1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集
        1.3.2显微操作针的制备
        1.3.3 受精卵的RNA显微注射
    1.4 囊胚基因型打靶结果的鉴定
    1.5 Tiki1基因敲除兔的制备
2 结果与分析
    2.1 Tiki1基因TALEN靶位点的设计
    2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的体外发育结果
    2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修饰情况
    2.4 注射胚胎移植受体怀孕和仔兔出生结果
3 讨论与结论



本文编号：3890943