将盘基网柄菌用于本科细胞生物学综合性实验教学初探——电穿孔转化绿色荧光蛋白

发布时间：2024-02-22 18:01

　　盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)是一个应用广泛的模式生物,非常适合用来研究胞质分裂、细胞运动、吞噬作用、趋化性、趋电性、信号转导以及个体发育过程中的细胞分化。该实验主要介绍电穿孔技术转化绿色荧光蛋白标记肌动蛋白基因质粒(Lifeact-GFP)进入盘基网柄菌活细胞中,抗性筛选(潮霉素B)获得阳性克隆子,最后借助荧光显微镜观察绿色荧光蛋白标记的微丝在盘基网柄菌的分布情况。综合性实验训练可提高学生的学习兴趣和综合运用理论知识的能力,进而可培养学生的科学研究思维。

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【部分图文】：

图1实验流程图

盘基网柄菌细胞的培养,不需要借助昂贵的实验设备,在标准的实验室就可以开展。因此,本文主要介绍本科学生细胞生物学综合性实验教学设计的主要内容,简述如下:以盘基网柄菌单细胞(AX2)阶段为材料,通过电穿孔(electroporation)技术将表达绿色荧光蛋白的质粒转化(....

图2Lifeact-绿色荧光蛋白在细胞运动前端的分布

在倒置荧光显微镜下,可以观察到绿色荧光蛋白在细胞膜上的分布情况(图2)。对于随机运动的细胞,绿色荧光蛋白会随细胞运动方向的改变而改变,但始终是在细胞前进方向的前端分布,即伪足部位分布较多。营养状态下的盘基网柄菌细胞运动能力相对较弱,如果想观察理想的运动情况,可以将细胞....

本文编号：3907045