牛干扰素高效表达菌株的构建

发布时间：2024-02-25 02:36

　　干扰素是在干扰素诱导剂作用下诱导特定的细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等作用的一类高活性、多功能糖蛋白。干扰素具有高度种属特异性,既可以抑制多种RNA病毒,又可以抑制多种DNA病毒。牛干扰素根据其作用类型分为I型干扰素和II型干扰素两种类型,其中I型干扰素主要分为α、β、ω、ε和τ五种亚型,II型干扰素主要有γ干扰素。BoIFN-α主要具有抗病毒的功能,在干扰素中,它的抗病毒能力是最强的,对动物病毒性疾病产生很好的治疗和防治作用。因此研究牛干扰素对动物病毒性疾病的防治具有重大意义。本实验成功构建了四种表达载体:(1)本实验成功克隆牛干扰素基因,并连接到pET-28a载体上,经测序,结果完全正确。(2)为提高蛋白表达量,在不改变干扰素氨基酸序列的前提下,利用大肠杆菌对密码子的偏好性,对干扰素序列进行优化,并连接到pET-28a载体上。(3)为提高蛋白表达量,在pET-28a-BoIFN-α-t上串联表达元件,经测序表达元件已成功连接到pET-28a-BoIFN-α上。(4)为提高蛋白可溶性表达,将BoIFN-α基因连接到低温表达载体表达载体pET-28a-sumo上,经测序,结果完...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1BoIFN-α高保真PCR结果

同2.3.2中的（6）。列BoIFN-α原核表达载体的构建菌对密码子的偏好性，在不改变BoIFN-α氨基酸优化，并连接到pET-28a载体上，优化过程及AN软件将原序列与优化后序列进行序列比对增BoIFN-α的产物分析进行胶回收跑胶鉴定后，电泳结果显示获得与....

图2-3重组质粒pET-28a-BoIFN-α双酶切的鉴定

图2-2pET-28a-BoIFN-α菌落PCRNAMarker，1-9：pET-28a-BoIFN-α，10：pET-28a-BoIFN-α双酶切的鉴正确的阳性菌落提取质粒后，进行双酶基因及pET-28a条带大小一致的的电2-3）。并且送至公司的质粒显示测序完全....

图2-4重组质粒pET-28a-BoIFN-α测序序列比对2.5.5PCR扩增BoIFN-α-t的产物分析

2.5.4重组质粒pET-28a-BoIFN-α测序将双酶切鉴定正确的质粒送公司测序，序列对比后发现结果完全正确，结果如图2-4：

图2-5BoIFN-α-t高保真PCR结果

图2-5BoIFN-α-t高保真PCR结果（A）M：DL2000DNAMarker，1-2：加第一段转录终止序列（B）M：DL2000DNAMarker，1-2：加第一段转录终止序列2.5.6pET-28a–BoIFN-α-t阳性菌落的鉴定将连接体系转化至....

本文编号：3909938