蓝舌病Ⅰ型病毒VP3蛋白的可溶性表达纯化及免疫原性分析

发布时间：2024-03-02 09:21

　　蓝舌病是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的一种非接触性传染疾病,通过库蠓属的媒介昆虫在家养或者野生的反刍类动物之间进行传播。受BTV感染的绵羊通常表现出发热、粘膜水肿、溃疡等临床症状。BTV病毒为二十面体对称的RNA病毒,有27种不同血清型。BTV由7种结构蛋白(VP1～VP7)和5种非结构蛋白(NS1,NS2,NS3/NS3a,NS4,NS5)组成。L3基因所编码的VP3蛋白,相对来说是高度保守的结构蛋白,含有群特异性抗原决定簇,是病毒颗粒的主要核心蛋白。本研究通过原核表达系统正确表达蓝舌病I型病毒VP3蛋白并完成纯化,以此来研究该蛋白刺激机体产生保护作用和特异性抗体的情况。构建了p ET-32a-VP3、p ET-28a-VP3、p ET-28a-Nus A-VP3这3个重组载体,转化E.coli BL21(DE3);将p ET-28a-VP3转化BL21(DE3)(Tf16);用L-阿拉伯糖及IPTG诱导表达,以选取最优表达方案。最终选用BL21(DE3)(p ET-28a-VP3-Tf16)为最优表达菌,20℃,0.3 mmol/L的IPTG及3.5...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1BTV结构蛋白分布图

1文献综述5形成BTV颗粒的外层球状基序[55]，VP5相对于VP2而言是保守的外衣壳蛋白，可作为次要的血清型特异性蛋白，还有助于将成熟的病毒颗粒从内体区室释放到宿主细胞的细胞质中。核衣壳（称为“核心”）具有两个同心层：外层由VP7组成，最内一层由VP3组成，这两种蛋白在所有的B....

图2.1标签蛋白NusA载体的构建Fig.2.1ConstructionofNusAvector

2VP3蛋白的表达与纯化17计标签蛋白NusA的引物（序列如表2.5所示），并由上海生工生物工程有限公司合成，下划线部分为NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点，斜体部分为保护性碱基，括号内为凝血酶切割位点。NusA标签蛋白重组载体构建的原理如图2.1所示，将NusA标签重组到pET-28....

图2.1BTV-1VP3蛋白二级结构预测

2VP3蛋白的表达与纯化232.2.2构建VP3原核表达载体2.2.2.1目的基因的优化及引物的合成根据BTV-1血清型VP3蛋白在NCBIGenBank公布的序列（GenBankaccessionNo.MG255581.1），用DNAStar预测VP3蛋白的二级结构，如图2.1....

图2.2原核表达载体的构建示意图

2VP3蛋白的表达与纯化24图2.2原核表达载体的构建示意图Fig.2.2Constructionofrecombinantvector.2.2.2.2目的基因VP3的PCR扩增及回收（1）扩增VP3目的基因：VP3质粒为模板，PCR体系如表2.11所示。表2.11目的基因PCR....

本文编号：3916660