烟草NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆及分析

发布时间：2024-03-07 19:05

　　通过同源克隆法获得烟草抗病基因同源序列(RGAs),为烟草抗病基因的筛选和相关研究提供帮助。基于抗病基因的NBS-LRR保守结构域,筛选并合成了3对简并引物,扩增烟草中的NBS-LRR类抗病基因。获得了4条与抗病基因具有高度同源性的NBS-LRR类烟草抗病基因同源序列(TRGA,登录号:MK634316,MK634317, MK634318, MK634319),目的片段大小均在500 bp左右;BLAST X分析表明,获得的4个烟草RGAs与已知RGAs具有高度相似性,氨基酸相似性为97%～100%;聚类分析将其分成2大类,包括TIRNBS-LRR和non-TIR-NBS-LRR两类抗病基因,其编码氨基酸序列含有NBS保守区的典型特征基序。通过简并引物进行同源扩增是分离烟草RGAs的有效方法,可为进一步抗病基因筛选及抗病分子育种奠定基础。

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【部分图文】：

图1NBS-LRR类抗病基因保守序列结构

采用3对简并引物(表1)，对烟草DNA进行PCR扩增，将所得PCR产物经回收、克隆，然后进行菌落PCR筛选后测序，得到5条与已知抗病基因具有高度同源性的NBS-LRR类烟草抗病基因同源序列(tobaccoresistancegeneanalogs,TRGA)，目的片段大小均....

图2简并引物用于烟草RGAs的扩增电泳检测

图1NBS-LRR类抗病基因保守序列结构1.2烟草RGAs与已知R基因的同源性分析

图3烟草RGAs氨基酸序列比对分析

利用DNAMAN软件对得到的测序结果经行翻译和多重序列比对分析(图3)，分别与GenBank中登录的拟南芥RPM1(X87851)，烟草N(AAA50763)，亚麻L6(AAA91022)，番茄PRF(U65391)及水稻Xa-1(BAA25068)等植物R基因进行氨基酸同源性比....

图4烟草RGAs氨基酸序列与已知植物R基因NBS区域的聚类分析

Meyers等(1999)报道显示通过Kinase-2结构域最后一个氨基酸基序可以区分nonTIR-NBS-LRR和TIR-NBS-LRR类基因，如果最后一个氨基酸为天冬氨酸(D)，则为TIR-NBS-LRR类基因；如果为色氨酸(W)，则为nonTIR-NBS-LRR类基因，准确....

本文编号：3921601