DNA醛基修饰的选择性荧光标记研究

发布时间：2024-03-22 05:19

　　醛基是DNA中天然核苷酸修饰的重要基团,在表观遗传学的研究中具有重要意义。这些醛基修饰碱基包括5-醛基胞嘧啶(5fC),5-醛基尿嘧啶(5fU),脱碱基位点(AP),它们在真核生物和原核生物的基因表达调控中发挥关键作用,并且修饰水平与某些疾病密切相关。5fC,5fU,AP三者之间存在某些联系,比如参与DNA的主动去甲基化、改变DNA的结构和稳定性从而造成DNA损伤,与蛋白质发生作用形成DNA-蛋白质交联物等,因此,本论文以三种碱基为共同研究对象,致力于用小分子荧光探针同时标记和检测它们。本论文设计并合成了萘酰胺-羟胺和萘酰胺-乙二胺两种探针,通过分别比较两者与三种不同含有醛基的碱基单体反应的活性和稳定性,最终选定萘酰胺-羟胺为较佳的探针。本论文用该探针首次选择性标记了DNA中含有的全部天然醛基包括5fC、5fU和AP,而该探针对其他基团如羟甲基,甲基等修饰的碱基不起作用,表明了探针分子对醛基的高度特异性。本论文详细研究了产物的荧光特性,讨论了羟胺对DNA中醛基的反应活性,为设计选择性标记修饰DNA的化合物提供了重要参考,期望未来本论文设计的探针能用于活体内醛基的定量检测。

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-2TET和TDG酶参与的DNA的主动去甲基化过程

DNA醛基修饰的选择性荧光标记研究它们可能是额外的表观遗传标记，能够对基因表达5mC的氧化形式中，5fC尤为突出，因为它含有一内潜在的亲核试剂具有反应活性，如氨基酸、多肽和比，最近的蛋白质组学研究已经确定了一些核蛋这导致我们假设5fC的醛基基团能够与DNA结NA-蛋....

图1-35fC与核小体组蛋白作用形成可修复的DNA-蛋白交联物（DPCs）

学和表观遗传调控中发挥作用。反过来，5fC介导的DN通过干扰DNA复制、转录和修复来危害基因稳定性。图1-2TET和TDG酶参与的DNA的主动去甲基化过程[7]。

图1-6AP与核小体组蛋白尾部赖氨酸的氨基作用引起DNA链断裂过程示意图

武汉大学硕士学位论文复过程中作为一种短暂的中间物外，还有越下游生物机制和途径。例如，AP位点的形成，G-四链体中存在的氧化损伤位点8oxoG引起要进一步的调查，以确定这一修饰的真正意调控中起关键作用。另外，有研究表明，在染赖氨酸的氨基作用形成席夫碱，然后经过β消），并....

图1-75fC的三种检测方法

(1)使用适当的试剂进行化学标记，提荧光检测；(3)亲和性富集，随后消化和ESI-MS或扩质联用的检测方法有一种基于质谱的技术可以做到直接测量长片态下难以进入气相的压力状态，不能满足MSI-TOF质谱可以检测到聚核苷酸（高达100个酸（10-100μM）才能被检测....

本文编号：3934690