γ-CGTase酶学性质及产物特异性影响因素

发布时间：2024-03-23 11:33

　　将γ-环糊精葡萄糖基转移酶(γ-CGTase)的特有区域作为判断依据,在美国国家生物信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库中,通过序列比对及生物信息学分析,筛选出一种新型基因,并将其克隆表达得到一种酶。利用高效液相色谱-质谱联用进行产物鉴定,表明该酶为γ-CGTase;酶分子质量大约为80 k Da,最适温度50℃,最适pH 10. 0;无α-环糊精生成;甲醇、乙醇、环己烷、十二醇激活γ-CGTase活力,异丙醇和正丁醇抑制γ-CGTase活力;反应时间、淀粉质量浓度及乙醇体积分数均会影响γ-CGTase的产物特异性。HPLC结果显示,在10%的乙醇最终体积分数条件下,γ-CGTase催化产物中γ-环糊精的比例由40. 11%增加至78. 20%,专一性提高了94. 96%。该研究提供了一种新型的γ-CGTase,为提高γ-CGTase产物特异性提供研究基础。

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【部分图文】：

图2纯化后γ-CGTase的SDS-PAGE分析

温度是影响酶催化作用的一个重要因素，在最适温度下，酶催化活性最强，酶促反应速率最大，当反应温度高于或低于最适温度时，酶活力均会降低进而影响酶促反应速率。由图5可知，γ-CGTase的最适温度为50℃，与现有报道的γ-CGTase最适温度40～65℃接近[22-23]。γ-CGTa....

图3γ-CGTase产物高效液相色谱图

图2纯化后γ-CGTase的SDS-PAGE分析图4γ-CGTase产物的超高效液相色谱-质谱联用图

图4γ-CGTase产物的超高效液相色谱-质谱联用图

图3γ-CGTase产物高效液相色谱图图5温度对γ-CGTase酶活力的影响

图1γ-CGTase保守区域及关键序列分析

采用MEGA6软件将NCBI数据库中Bacillussp.FJAT-44876的蛋白序列与已知表达α-CD、β-CD和γ-CD的CGTase序列进行比对，结果如图1-A所示。来源于Bacillussp.FJAT-44876的蛋白序列共有5个结构域(数据未体现)[17]、6个保....

本文编号：3935860