转OsALS基因浮萍的抗除草剂活性分析

发布时间：2024-03-23 23:41

　　以乙酰乳酸合成酶为靶标的除草剂具有用量少、选择性强、杀草谱广等特点,在田间被广泛应用。本研究前期筛选到一株抗咪唑啉酮类除草剂"普施特"的水稻植株,并通过克隆获得了目的基因OsALS,序列分析发现OsALS基因的第627位点发生了突变。本研究为进一步研究突变的OsALS基因与水稻抗除草剂活性之间的关系,将OsALS构建到了p CAMBIA1301载体上,获得了转OsALS基因的浮萍并进行了转基因浮萍对除草剂的活性分析。研究结果表明,OsALS基因中627位点的突变很可能是导致转基因浮萍对除草剂"普施特"产生抗性的重要原因,研究结果为水稻种质资源和除草剂的开发提供了重要支持。

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【部分图文】：

图1OsALS基因过表达载体构建图

为了研究OsALS基因对除草剂抗性的影响，笔者使用35S启动子驱动OsALS基因，使其过量表达，将其连入双元表达载体pCAMBIA1301中获得完整的表达盒35S:ALS:ployA，并将该双元载体导入农杆菌EHA105中。使用农杆菌介导的转化方法转化浮萍，以达到在浮萍中过表达O....

图3侵染浮萍的再生过程

按照课题组建立的遗传转化方法，用EHA105-pCAMBIA1301-ALS菌株对浮萍愈伤组织进行了侵染，经恢复和再生培养等过程，获得5个再生株系，笔者对其中4个进行了鉴定和抗性筛选。完整的再生过程如图3所示。为获得转化株系，首先采用潮霉素（Hyg）进行了抗性筛选，使用不同浓度....

图4Hyg筛选不同株系8d时的表型

为获得转化株系，首先采用潮霉素（Hyg）进行了抗性筛选，使用不同浓度的Hyg对再生植株进行筛选，并用非转基因浮萍（WT）作为对照。结果显示，当浓度为1.0mg·L-1时，WT几乎全部死亡。随着Hyg浓度升高，再生植株的生长状态越来越差，对Hyg的抗性越来越低，当Hyg浓度为2.....

图5抗性株系的基因组PCR产物电泳检测结果

为进一步对抗性株系进行鉴定，采用了基因组PCR检测及测序验证。首先，用SDS法提取野生型株系和转基因抗性株系总基因组DNA。PCR结果显示，4个抗性株系均有目的基因条带，而WT株系未有扩增条带，结果如图5所示，并将4个株系DNA扩增产物进行测序。测序结果中，错误匹配点为克隆ALS....

本文编号：3936646