芍药乙烯受体PlETR1基因过表达载体的构建及烟草转化

发布时间：2024-04-20 09:42

　　芍药是乙烯敏感型花卉,乙烯受体感知并传导乙烯信号,在乙烯信号转导途径中发挥重要作用。芍药PlETR1基因cDNA全长序列已分离,为了鉴定芍药PlETR1基因的功能,本研究基于PlETR1基因和表达载体序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了一对特异性PCR引物,采用RT-PCR技术扩增出了PlETR1编码区片段,进一步构建了芍药PlETR1基因过表达载体。基于优化的模式植物烟草的组培体系和筛选出的潮霉素抗性浓度,应用农杆菌介导的叶盘法开展了芍药PlETR1基因转化烟草的研究,对转基因抗性烟草植株进行了PCR检测,结果表明HPT基因和芍药PlETR1基因已导入到烟草基因组中,且芍药PlETR1基因转录表达成功,为下一步鉴定芍药PlETR1基因的功能提供科学依据。

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【部分图文】：

图1PlETR1基因编码区的PCR扩增及重组子的双酶切鉴定

在潮霉素浓度为55mg/L时，对照组外植体彻底黄化且未有愈伤分化；处理组虽然有些微黄化，但是愈伤组织分化较多且不定芽诱导率高(表3)。因此确定基因转化后的分化培养基为MS+0.2mg/L6-BA+2.0mg/LNAA+500mg/L头孢霉素+55mg/L潮霉素。图2....

图2PlETR1基因过表达载体的构建

图1PlETR1基因编码区的PCR扩增及重组子的双酶切鉴定1.5烟草抗性植株的获得

图3抗性愈伤组织的产生

农杆菌侵染过的烟草叶片在抗性培养基上分化产生愈伤组织，并且只在叶片边缘产生愈伤组织；未被农杆菌侵染过的叶片全部死亡(图3)。取下叶片边缘上产生的愈伤组织小点，将其接种到新的筛选分化培养基上进行继代培养。待不定芽生长至5～6片叶片时(图4A)，将其接种至生根培养基中，待根伸长到3～....

图4烟草不定芽分化,根的诱导及驯化

图3抗性愈伤组织的产生1.6PlETR1转基因烟草植株的PCR鉴定

本文编号：3959229