rhtA与tolC的表达对大肠杆菌血红素合成的影响

发布时间：2024-04-26 21:19

　　血红素(Heme)是含有铁离子的卟啉化合物,作为过氧化物酶等多种酶的辅因子,具有多种重要的生物学功能。本论文旨在探究大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)血红素前体转运蛋白的表达对于血红素合成代谢的影响。通过构建前体转运蛋白基因rhtA与tolC缺失菌株,分析血红素及其前体含量的变化;基于转录组以及qRT-PCR实验结果,阐述缺失菌株中血红素合成的调控机制。主要研究结果如下:(1)血红素前体转运蛋白的表达调控。通过Red同源重组的方式,构建大肠杆菌rhtA缺失、tolC缺失和tolC、rhtA双缺失菌株WT-R、WT-T与WT-RT。通过一步克隆方式构建rhtA、tolC与双缺失基因的回补菌株pET-R、pET-T与pRT-TR。将过表达hemA基因的质粒pEA分别转入WT、WT-R、WT-T与WT-RT中,得到菌株pEA、pEA-R、pEA-T与pEA-RT。生长曲线测定结果表明tolC、rhtA缺失对于E.coli生长没有显著影响。(2)血红素前体转运蛋白表达对于血红素合成的影响。与原菌株WT相比,WT-R胞外5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic ...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1血红素结构图

合物的典型代表，其卟啉环中为C34H32N4FeO4，分子质量为熔点约在300℃以上，不溶于钠的水溶液或热醇中[2]。种生物学功能，可以作为生）的辅因子，在转录和翻译水以及细胞分化[3]。在有氧以及Heme参与了生物细胞中许5,6]。对原核生物而言，Heme更[9,10]....

图1-3ALA合成途径Fig.1-3ThesyntheticpathwayofALA

生物体内通常有两条ALA合成途径：C4途径（theSheminpathw以及C5途径[29,30,31]。其中，C4途径中的5-氨基乙酰丙酸合成酶（5-aminolevulinicsynthase，ALAS）以5'-磷酸吡哆醛（5'-pyridoxalpho....

图1-2ALA结构图

通常有两条ALA合成途径：CC4途径中的5-氨基乙酰丙酸吡哆醛（5'-pyridoxalphosphatA）和甘氨酸（Glycine）缩合ALA，反应涉及三个酶：谷氨酰-tRNA还原酶、谷氨酸-1-半GSA-AM），分别由gltX[35,36]生成谷氨酰-tRNA[4....

图1-4E.coli中的血红素合成代谢Fig.1-4ThehemesynthesisE.coli

第一章绪论1.2.2大肠杆菌中Heme的合成如图1-4所示，大肠杆菌以C5途径合成ALA，经GluRS、GluTR和GSA-AM三步催化生成ALA。ALA由基因hemB编码的ALA脱水酶（ALAdehydratase，ALAD）催化下缩合形....

本文编号：3964891