牛胃溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达、发酵参数优化及抑菌活性研究

发布时间：2024-04-26 23:23

　　为了利用毕赤酵母表达系统表达具有生物学活性的重组牛胃溶菌酶(rcsLYZ)蛋白,试验构建了能分泌表达rcsLYZ的重组酵母菌株,并通过因子筛选试验(Plackett-Burman)设计和响应面方法研究了接种量等参数对rcsLYZ活性的影响,并且利用管碟法检测了rcsLYZ的抑菌效果。结果表明:培养体积、诱导时间和甲醇浓度对rcsLYZ表达水平有显著影响(P<0.01);响应面法优化后rcsLYZ活性为415.2 U/mL(培养体积为42 mL,诱导时间为89 h,甲醇浓度为1.1%),与理论预测最大值(431 U/mL)接近;rcsLYZ活性相较于优化前有较大提高;rcsLYZ对溶壁微球菌、藤黄微球菌及金黄色葡萄球菌具有较好的抑制作用,对大肠杆菌、铜绿假单胞菌和蜡样芽孢杆菌无抑制作用,说明rcsLYZ可以在毕赤酵母中表达,优化后活性较好,对部分细菌有抑菌效果。

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【部分图文】：

图1重组表达载体的酶切验证

重组pPICZαA-csLYZ质粒用XhoⅠ和XbaⅠ酶切后进行琼脂糖凝胶电泳。在500bp附近发现酶切产物(420bp),大小与理论相符(见图1泳道4)。重组pPICZαA-csLYZ质粒经SacⅠ酶切后电转化至X33酵母细胞中。在含600μg/mLZeocin的YPD....

图2重组酵母菌株的PCR鉴定及其表达

选取3.1中表达量较高的4#菌株作为菌种用于后续发酵参数的筛选。通过Designexpert8软件设计了7因素2水平的Plackett-Burman试验(见表2)。每组试验重复3次并取平均值作为最终结果。表2Plackett-Burman试验设计及结果U·mL-1处理....

图4牛胃溶菌酶抑菌试验结果

总之,本研究成功构建了分泌表达rcsLYZ的重组酵母菌株,并通过Plackett-Burman试验设计评估接种量等参数对rcsLYZ表达的影响,结果接种量、培养体积、诱导时间及甲醇浓度等因素显著影响rcsLYZ的表达,选取培养体积等3个因素进行了Box-Behnken试验及响应面....

图3各因素对牛胃溶菌酶活性交互影响效应的响应面分析图与等高线图

表5二次回归模型的方差分析方差来源平方和(SS)自由度(df)均方和(MS)F值P值(Prob>F)模型1.20×105913330.7535.70<0.0001A15664.50115664.5041.950.000....

本文编号：3965023