拟南芥SnRK2.6及AFPs对转录因子ABI5作用位点的研究

发布时间：2024-05-10 23:47

　　ABI5及其亚家族成员是ABA信号转导通路中关键的碱性亮氨酸拉链类转录因子,它们参与并调控了ABA信号转导途径中的许多生理生化过程,如种子的发育与萌发、各种生物及非生物胁迫的应答等。ABI5的稳定性和转录激活活性受多种激酶和磷酸酶的调节。虽然有报道表明,过表达ABI5植株无明显表型,但是ABI5多个位点的模拟磷酸化突变体在不施加外源ABA的情况下可以激活ABI5控制的下游基因的转录表达,因此认为ABI5的磷酸化修饰对ABI5的转录激活活性起重要作用。Sn RK2家族被认为介导了ABI5多个位点的磷酸化,其中研究的较为清楚的是Sn RK2.6。我们通过多序列比对分析发现ABI5上存在多个Sn RK2的潜在磷酸化位点,但是这些潜在磷酸化位点是否均能被Sn RK2.6识别并磷酸化目前还不清楚。AFPs是一类能与ABI5发生相互作用的蛋白分子。有研究表明AFPs可促进ABI5的泛素化降解,并负向调节ABA信号。然而AFPs是如何通过促进ABI5蛋白降解来实现对ABA信号的负向调节的分子机制还不清楚。我们先前的研究表明AFP4/5可介导/激活ABI5的转录激活活性。然而,在AFPs上既没有激酶活...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 ABA信号转导概述
    1.2 ABI5亚家族
    1.3 ABI5相互作用蛋白的研究进展
    1.4 研究目的及内容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 主要方法
第二章 拟南芥ABI5 亚家族蛋白序列比对及ABI5 双向缺失突变体的构建
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株与载体
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 培养基、抗生素及常用溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 ABI5保守区划分
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 ABI5 大片段缺失突变体的PCR扩增
        2.2.4 酵母双杂交载体p GADT7-m ABI5 重组质粒的构建
        2.2.5 重组载体转化酵母AH109及转录自激活活性的检测
            2.2.5.1 AH109酵母感受态细胞的制备及转化
            2.2.5.2 重组载体在 AH109 细胞中的毒性检测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 ABI5亚家族蛋白序列比对结果及保守区划分
        2.3.2 ABI5双向缺失突变体融合蛋白示意图
        2.3.3 p GADT7-m ABI5 的构建
        2.3.4 mABI5在酵母中的转录自激活活性检测
第三章 Sn RK2.6在ABI5 上的作用位点分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株与载体
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 仪器
        3.1.4 常用试剂的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 AH109酵母感受态细胞的制备
        3.2.2 p GBKT7-Sn RK2.6与p GADT7-m ABI5 共转化AH109 酵母感受态细胞
    3.3 结果与分析
        3.3.1 ABI5上潜在磷酸化位点分析
        3.3.2 Sn RK2.6与ABI5 N端及ABI5C端作用的酵母双杂交结果
        3.3.3 Sn RK2.6与ABI5 N端删除突变体作用的酵母双杂交结果
        3.3.4 Sn RK2.6与ABI5 C端删除突变体作用的酵母双杂交结果
        3.3.5 Sn RK2.6与ABI5 上删除单元作用的酵母双杂交结果
第四章 AFPs在 ABI5 上的相互作用位点分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 菌株与载体
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 仪器
        4.1.4 常用试剂的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 AH109酵母感受态细胞的制备
        4.2.2 p GBKT7-AFPs与 p GADT7-m ABI5 共转化AH109 酵母感受态细胞
        4.2.3 AFP精确相互作用位点载体p GADT7-m ABI5 的构建
        4.2.4 AFPs序列比对分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 AFPs序列比对
        4.3.2 AFPs与 ABI5 N端及ABI5C端作用的酵母双杂交结果
        4.3.3 AFPs与 ABI5 N端删除突变体作用的酵母双杂交结果
        4.3.4 AFPs与 ABI5 C端删除突变体作用的酵母双杂交结果
        4.3.5 AFPs与 ABI5 上各删除单元相互作用的酵母双杂交结果
        4.3.6 AFPs与 ABI5上PTFGEMTLEDFLVK片段的酵母双杂交结果
        4.3.7 AFPs与 ABI5 片段点突变体的相互作用
第五章 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：3969202