Slug慢病毒表达载体的构建及对ZR75-1细胞上皮间质转化的影响

发布时间：2024-05-11 04:26

　　目的:构建锌指蛋白Slug基因的慢病毒真核表达载体,研究Slug对ZR75-1乳腺癌细胞上皮间质转化及迁移的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Slug全长编码序列,将其插入pCDH表达载体,构建pCDH-Slug真核表达载体,转染293T细胞,Western印迹检测Slug的表达;将重组质粒包装慢病毒感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞,Western印迹和免疫荧光检测Slug对E-钙黏蛋白表达的影响,采用划痕实验检测Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中对细胞迁移的影响。结果:双酶切实验证明Slug慢病毒表达载体构建成功;Western印迹表明Slug在293T细胞内表达成功;稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞株构建成功;镜下观察发现,稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞形态变为梭形;Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中可以抑制E-钙黏蛋白的表达;划痕实验发现Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中可以促进细胞迁移。结论:构建了Slug慢病毒真核表达载体,Slug可以促进上皮间质转化,并通过调控E-钙黏蛋白表达促进细胞迁移。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 pCDH-Slug慢病毒表达载体的构建
    1.3 稳定克隆筛选
    1.4 Western印迹检测
    1.5 免疫荧光检测
    1.6 划痕实验
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 PCR扩增Slug基因
    2.2 pCDH-Slug表达载体的构建
    2.3 pCDH-Slug在293T细胞内的表达鉴定
    2.4 Slug对ZR75-1乳腺癌细胞形态的影响
    2.5 Slug对E-钙黏蛋白表达的影响
    2.6 Slug对ZR75-1乳腺癌细胞迁移的影响
3 讨论



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