金黄色葡萄球菌类肠毒素Q的免疫活化作用及抗肿瘤活性检测

发布时间：2024-05-12 08:19

　　背景金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxins,SEs)是一类具有较强超抗原活性的蛋白。SEs作为典型的超抗原,在临床上具有显著的抗肿瘤活性,但其所引起的发热及致呕吐毒性等副作用严重限制了其在恶性肿瘤生物治疗中的广泛应用。而金黄色葡萄球菌类肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin-like,SEls)的发现为肿瘤的免疫治疗提供了潜在的候选生物制剂,其具有与SEs相似的结构及其超抗原活性,但无致呕吐毒性或仅具有较低的呕吐毒性。目的1.构建金黄色葡萄球菌类肠毒素Q(SElQ)的原核表达载体。2.探讨SElQ对小鼠脾淋巴细胞以及人外周血单核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs)活化的影响。3.检测SElQ的体内外抗肿瘤活性。方法1.通过PCR技术克隆获得selq基因,双酶切后连接至pET28a原核表达载体,转化E.coli DH5α菌株后进行菌落PCR及质粒双酶切验证,随后转化E.coli BL21菌株进行诱导表达。通过BeaverBeads?IDA-Nickel试剂盒纯化SElQ蛋白。2...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1SElQ原核表达载体构建及鉴定图注：A：pET-28a(+)载体图；B：selq基因扩增的引物；C：SElQPCR扩增产物片段；D：菌落PCR（泳道1和2）；pET28a-SElQ的双酶切片段（泳道3和4）；E：SElQ蛋白的表达：加入1mMIPTG

图1SElQ原核表达载体构建及鉴定图注：A：pET-28a(+)载体图；B：selq基因扩增的引物；C：SElQPCR扩增产物片段；D：菌落PCR（泳道1和2）；pET28a-SElQ的双酶切片段（泳道3和4）；E：SElQ蛋白的表达：加入1mMIPTG在30℃诱导5h....

图2SElQ蛋白纯度的检测Fig.2ThepurityofSElQwasdeterminedbysilverstaining

新乡医学院硕士学位论文h、1h、2h、3h、4h和5h，每隔1h收集1mL菌离心；加入100μLPBS重悬沉淀后后加入SDSSDS-PAGE电泳，通过考马斯亮蓝和快速银染试定结果如图1E所示，经IPTG诱导后可高效获得与预期结果一致。随后用BeaverBead....

图3SElQ对小鼠脾淋巴和人PBMCs的影响

图3SElQ对小鼠脾淋巴和人PBMCs的影响图注：A-B：小鼠脾淋巴细胞和人PBMCs分别用不同浓度的SElQ刺激48h，用MTT法检测增殖能力（n=5）。红色虚线表示阴性对照组（BSA处理）的PI。*P<0.05；**P<0.01。Fig.3Effec....

图4SElQ刺激后CD4+和CD8+T细胞的增殖图注：A：流式细胞仪检测SElQ（1μg/mL）刺激后小鼠脾淋巴细胞中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分比

36图4SElQ刺激后CD4+和CD8+T细胞的增殖A：流式细胞仪检测SElQ（1μg/mL）刺激后小鼠脾淋巴细胞中CD4+和CD8+T淋巴细比。B-C：在SElQ刺激和未刺激的脾淋巴细胞中，CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分比和数据代表至少三个独立....

本文编号：3971114