改造人白细胞介素2基因序列并在大肠杆菌中做表达验证

发布时间：2024-06-01 17:16

　　论文主要研究了两个方面的内容。一是对人白细胞介素2基因序列进行了改造和优化。首先将人白细胞介素2基因编码序列(CDS)改造成大肠杆菌的高表达模式,选用了大肠杆菌高表达基因的核糖体结合位点(Shine-Dalgarno sequence,简称SD)序列,作为对比还选用了大肠杆菌低表达基因的SD序列。然后组装成“高表达SD+改造后CDS”和“高表达SD+改造前CDS”基因对照组;“高表达SD+改造后CDS”和“低表达SD+改造后CDS”基因对照组。前者主要考察改造CDS对基因表达的影响,后者主要检验SD序列的优化选择对基因表达的影响。二是将组装的两组基因序列在大肠杆菌TOP10中克隆及表达,通过实验来验证改造和优化后人白细胞介素2基因(hIL-2)表达水平的理论预测。理论推测改造后的hIL-2基因编码序列在大肠杆菌中的表达水平为CAI=0.884,原hIL-2基因编码序列在大肠杆菌中的表达水平为CAI=0.267。为了保证编码基因表达的正常启动,选取大肠杆菌rplL高表达基因的启动子区和终止子区来代替hIL-2基因的启动子区和终止子区。其中高表达SD序列选用该基因的SD序列,低表达SD序列...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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图3.1重组克隆载体pGM-T/hIL-2的构建图Fig.3.1ConstructionofrecombinantcloningvectorpGM-T/hIL-2IL的PCR产物经过电泳检测，对长度正确的片段进行胶回收，据浓度的大小与适量克隆载体pGM....

图3.2WIL的克隆转化

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本文编号：3986217