草鱼NRF2/ATF4通过相互作用上调HO-1的表达对抗内质网应激

发布时间：2024-06-04 18:47

　　内质网(ER)对细胞应激(包括代谢不平衡和/或蛋白质折叠不平衡)有很好的感觉和反应。对于第一个对内质网应激反应的受体,PERK与其他近端信号分子一起启动转录和翻译调节程序,称为未折叠蛋白反应(UPR)。持续的内质网应激的结果是活性氧物质的积累,以至于促进氧化应激状态。PERK信号通过激活核转录相关因子2(NRF2)和转录调节因子4(ATF4)来连接ER应激反应与氧化应激信号。NRF2同属于CNC家族,在其C-端含有一个典型的BRLZ结构域,并能通过调节下游靶基因血红素加氧酶1(HO-1)来减缓内质网应激程度。为了研究草鱼NRF2基因在内质网应激中的作用,我们重新克隆并鉴定了草鱼(Ctenopharyngodon idella)NRF2的开放阅读框(ORF),发现这条ORF(1782bp)是能够编码593个氨基酸的多肽并且包含了一个保守的bZIP结构域。系统进化树显示草鱼NRF2与其它鱼类的NRF2在进化上有着更为密切的关系。不同时间段TM(衣霉素)刺激CIK细胞后,RT-PCR检测发现CiNRF2 mRNA水平明显上调。以CiBIP为靶标,过表达CiNRF2后CiBIP mRNA明显下...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.2NRF2/ATF4-HO-1信号通路模式图

第一章前言为PERK磷酸化eIF2α的下游基因来调控CHOP基因的表达，从而促进细胞凋亡。通过酵母双杂交实验验证了ATF4可以作为NRF2的一个结合蛋白存在，形成的异源二聚体在应激反应中发挥重要作用[73]。当细胞处于内质网应激时，PERK与分子伴侣GRP78....

图3，1草鱼N田田2基因CDSF运‘3.ICDgofCIN卫FZge们e

第三章结果与分析第三章结果与分析克隆及其分析放阅读框（CDS）的克隆AGI93118.1）序列设计同源引物NRF2因部分同源片段。测序后用NCBI的似度，确定为草鱼NRF2基因。经过阅读框（图3.1）。

图3.2草鱼NRF2序列分析

结果显示CiNRF2的经典BRLZ（bZIP）结构域（483-547aa）位于近C端(图3.2B)。A1ATGATGGAGATTGAATTGCCTAAAATGCACCCAAGCCAACAGGATATGGAGCTGATAGAT1MMEIELPKMH....

图3.3草鱼NRF2系统进化树

3.3TM上调草鱼NRF2表达分析草鱼肾细胞（CIK）经过不同时间段的衣霉素（TM）刺激后，使用实时荧光定量PCR对草鱼NRF2基因的mRNA表达情况进行分析，结果如图3.5所示。TM会上调草鱼NRF2的表达，并且图中可以看出在4h开始上调，至36h达到最高....

本文编号：3989029