骨髓微环境中Wnt/β-catenin信号的活化对造血干细胞自我更新及扩增的调控作用
发布时间：2025-01-07 02:21
造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是所有血液细胞系的起源细胞,具有自我更新和持续增殖能力,担负着维持和重建造血等重要生理功能。造血干细胞微环境（Niche）是位于血管周围靠近骨小梁区,由骨髓间充质基质细胞及内皮细胞组成的维持和调节HSCs生理功能的局部组织微环境。在Niche中,Niche细胞通过粘附分子和膜表面信号分子来与HSCs直接或间接接触进而调控HSCs的自我更新、增殖、分化等一系列生物学行为。本课题通过在基质细胞（OP9）中活化Wnt/β-catenin信号通路,研究Niche中Wnt/β-catenin信号的活化对HSCs自我更新及扩增的调控作用。文章分为四个部分:（1）四种不同活化型β-catenin蛋白的基质细胞株的建立;（2）体外不同共培养条件下在基质细胞中活化β-catenin对于造血干/祖细胞的扩增影响;（3）基质细胞中活化β-catenin对于小鼠体内的造血重建能力的影响;（4）基质细胞中活化β-catenin调节造血干/祖细胞扩增的分子机制。研究结果如下:1:体外有血清共培养条件下,基质细胞中活化β-catenin信号能够扩...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 Wnt信号转导通路概述
1.1.1 经典的Wnt/β-catenin信号通路
1.1.2 非经典的Wnt/JNK信号通路和Wnt/Ca2+信号通路
1.2 造血干细胞概述
1.3 造血干细胞与骨髓微环境
1.4 骨髓Niche细胞对造血干细胞的调控作用
1.5 Wnt信号通路对HSCs功能的调控作用
1.6 本研究的目的及意义
第2章 不同活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株构建
2.0 前言
2.1 实验材料
2.1.1 质粒及细胞株
2.1.2 实验试剂及耗材
2.1.3 实验设备
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株的构建
2.2.3 Western-Blot
2.3 实验结果
2.3.1 不同活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株的构建
2.3.2 Western-Blot鉴定β-catenin蛋白的表达
2.3.3 讨论与分析
第3章 基质细胞中过表达β-catenin蛋白对造血干细胞体外扩增的影响
3.0 前言
3.1 实验材料
3.1.1 小鼠
3.1.2 实验试剂及耗材
3.1.3 实验设备
3.2 实验方法
3.2.1 实验试剂的配制
3.2.2 C57BL/6J小鼠骨髓单细胞悬液的制备
3.2.3 台盼蓝染色计数
3.2.4 流式抗体染色
3.2.5 造血干细胞与OP9体外共培养
3.2.6 细胞形态学观察
3.2.7 共培养后的细胞收集
3.2.8 流式分析操作
3.2.9 克隆形成实验
3.2.10 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 共培养细胞形态图
3.3.2 有血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于造血干细胞的体外扩增作用
3.3.3 无血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于造血干细胞的体外扩增作用
3.3.4 无血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于克隆形成能力的影响
3.3.5 讨论与分析
第4章 基质细胞中过表达β-catenin蛋白对小鼠造血重建的影响
4.0 前言
4.1 实验材料
4.1.1 小鼠
4.1.2 抗体
4.1.3 实验试剂及耗材
4.1.4 实验设备
4.2 实验方法
4.2.1 CD45.1小鼠骨髓中单细胞悬液的制备
4.2.2 细胞计数
4.2.3 流式抗体染色及分析分选
4.2.4 移植前造血干细胞与OP9 体外共培养
4.2.5 体外共培养后细胞的收集
4.2.6 竞争性移植实验
4.2.7 小鼠骨髓及外周血细胞采集
4.2.8 小鼠骨髓及外周血细胞流式分析
4.2.9 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 有血清条件下基质细胞中过表达β-catenin对造血重建的影响
4.3.2 无血清条件下基质细胞中过表达β-catenin对造血重建的影响
4.3.3 讨论与分析
第5章 β-catenin活化型基质细胞影响造血干细胞扩增的分子机制的研究
5.0 前言
5.1 实验材料
5.1.1 细胞
5.1.2 实验试剂及耗材
5.1.3 实验设备
5.2 实验方法
5.2.1 造血干细胞与OP9的非接触共培养
5.2.2 共培养后的细胞收集及流式细胞染色分析
5.3 实验结果
5.3.1 β-catenin活化型OP9细胞分泌因子类型的鉴定
5.3.2 讨论与分析
第6章 结论与展望
参考文献
致谢
本文编号：4024350
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 Wnt信号转导通路概述
1.1.1 经典的Wnt/β-catenin信号通路
1.1.2 非经典的Wnt/JNK信号通路和Wnt/Ca2+信号通路
1.2 造血干细胞概述
1.3 造血干细胞与骨髓微环境
1.4 骨髓Niche细胞对造血干细胞的调控作用
1.5 Wnt信号通路对HSCs功能的调控作用
1.6 本研究的目的及意义
第2章 不同活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株构建
2.0 前言
2.1 实验材料
2.1.1 质粒及细胞株
2.1.2 实验试剂及耗材
2.1.3 实验设备
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株的构建
2.2.3 Western-Blot
2.3 实验结果
2.3.1 不同活化型β-catenin蛋白的OP9细胞株的构建
2.3.2 Western-Blot鉴定β-catenin蛋白的表达
2.3.3 讨论与分析
第3章 基质细胞中过表达β-catenin蛋白对造血干细胞体外扩增的影响
3.0 前言
3.1 实验材料
3.1.1 小鼠
3.1.2 实验试剂及耗材
3.1.3 实验设备
3.2 实验方法
3.2.1 实验试剂的配制
3.2.2 C57BL/6J小鼠骨髓单细胞悬液的制备
3.2.3 台盼蓝染色计数
3.2.4 流式抗体染色
3.2.5 造血干细胞与OP9体外共培养
3.2.6 细胞形态学观察
3.2.7 共培养后的细胞收集
3.2.8 流式分析操作
3.2.9 克隆形成实验
3.2.10 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 共培养细胞形态图
3.3.2 有血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于造血干细胞的体外扩增作用
3.3.3 无血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于造血干细胞的体外扩增作用
3.3.4 无血清条件下基质细胞中活化β-catenin对于克隆形成能力的影响
3.3.5 讨论与分析
第4章 基质细胞中过表达β-catenin蛋白对小鼠造血重建的影响
4.0 前言
4.1 实验材料
4.1.1 小鼠
4.1.2 抗体
4.1.3 实验试剂及耗材
4.1.4 实验设备
4.2 实验方法
4.2.1 CD45.1小鼠骨髓中单细胞悬液的制备
4.2.2 细胞计数
4.2.3 流式抗体染色及分析分选
4.2.4 移植前造血干细胞与OP9 体外共培养
4.2.5 体外共培养后细胞的收集
4.2.6 竞争性移植实验
4.2.7 小鼠骨髓及外周血细胞采集
4.2.8 小鼠骨髓及外周血细胞流式分析
4.2.9 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 有血清条件下基质细胞中过表达β-catenin对造血重建的影响
4.3.2 无血清条件下基质细胞中过表达β-catenin对造血重建的影响
4.3.3 讨论与分析
第5章 β-catenin活化型基质细胞影响造血干细胞扩增的分子机制的研究
5.0 前言
5.1 实验材料
5.1.1 细胞
5.1.2 实验试剂及耗材
5.1.3 实验设备
5.2 实验方法
5.2.1 造血干细胞与OP9的非接触共培养
5.2.2 共培养后的细胞收集及流式细胞染色分析
5.3 实验结果
5.3.1 β-catenin活化型OP9细胞分泌因子类型的鉴定
5.3.2 讨论与分析
第6章 结论与展望
参考文献
致谢
本文编号：4024350
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