革兰氏阴性细菌外膜关键分子对细胞全局调控及聚羟基脂肪酸酯合成效率的影响机制

发布时间：2025-01-13 22:46

　　脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和附属结构是革兰氏阴性菌的膜壁结构组成部分,这些非必需结构消耗了大量的原料和能量。本课题以大肠杆菌（Escherichia coli K-12）和恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida KT2442）为出发菌,建立了适用于基因组精简的敲除系统,构建了一系列膜壁结构精简菌株,解析了膜壁结构关键分子对细菌细胞全局影响机制,并利用一些精简菌株作为宿主生产可降解生物塑料聚羟基脂肪酸酯（PHA）。本论文主要研究结论如下:（1）通过删除LPS合成关键基因rfaD构建了大肠杆菌LPS结构精简菌株,合成最简LPS结构,即Kdo₂-lipid A,并通过基因工程改造提高Kdo₂-lipid A合成量。在大肠杆菌K-12菌中,通过敲除核心糖中L-D-庚糖合成关键基因rfaD,获得LPS分子结构精简菌株WJW00。通过SDS-PAGE银染,薄板层析,和电喷雾电离质谱鉴定其LPS结构为Kdo₂-lipid A。WJW00合成1.31μM（2.94μg/mL）的Kdo₂

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-2大肠杆菌K-12中Kdo2-lipidA结构及合成[11,12]

图1-2大肠杆菌K-12中Kdo2-lipidA结构及合成[11,12]Fig.1-2StructureandbiosynthesisofKdo2-lipidAinE.coliK-12[11,12]1.1.3多糖链分子的合成途径及其功能L....

图1-6基于多种重组系统复合的微生物基因组精简策略[69]

第一章绪论微生物基因组中不保守的必需基因往往与细胞独特的结构和功能有关。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的主要区别在于细胞膜壁结构和组成成分，二者基因组中与膜壁相关的必需基因也存在较大差异[87]。微生物必需基因的保守性与其所编码蛋白在细胞中的作用密切相关。多数微生物的必需基因所编码....

图1-8PHA的生物合成途径Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.

图1-8PHA的生物合成途径Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.2聚羟基脂肪酸酯的代谢改造研究进展在大肠杆菌中表达phbCAB三个基因即可合成聚3-羟基丁酸酯（xybutyrate,PHB）。....

图2-6ptsO基因敲除和lpxC、msbA表达的凝胶电泳验证图

图2-5重组质粒pWSK29-lpxC（b）、pWSK29-lpxC（c）和pWSK29-lpxC-msbA（d）的质粒图谱Fig.2-5ThemapsofpWSK29-lpxC(b),pWSK29-lpxC(c)andpWSK29-lpxC-msbA(d....

本文编号：4026009