花青素合成转录因子PAP2植物表达载体构建及其遗传转化

发布时间：2025-01-13 23:19

　　 AtPAP2基因是拟南芥花青素生物合成途径中的重要调控基因,为了实现该基因在烟草中的高效表达,从拟南芥中分离克隆出了AtPAP2基因并构建了植物表达载体,利用农杆菌介导的侵染方法,将该基因成功转入到烟草受体材料中,并获得了紫色的转基因烟草植株,相对于野生型烟草,该烟草在根、茎、叶等组织上均表现出不同程度的紫色。进一步的qRT-PCR分析结果表明,在花青素生物合成途径中,AtPAP2基因的表达可以上调从4-香豆酰CoA到最终合成花青素过程中的相关基因,促进了合成反应的进行,对花青素的合成具有重要的作用。该研究对于揭示AtPAP2基因的作用以及烟草花青素合成途径相关基因的调节机理具有重要的意义。

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

图1 花青素生物合成途径

利用RNA提取试剂盒从拟南芥的叶片中提取总RNA(图2A),以表1中pPAP2-F和pPAP2-R为特异性引物,拟南芥总RNA反转录获得的cDNA为模板,通过PCR扩增获得了AtPAP2基因,1%琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,获得的目的基因条带约为750bp,与预期AtPAP2基....

图2 拟南芥叶片总RNA提取和AtPAP2基因克隆

图1花青素生物合成途径2.2植物表达载体的构建及其转化至农杆菌

图3 植物表达载体pGNP-PAP2的构建图谱

根据图3所示的植物表达载体图谱进行载体构建。先提取pMD18T-PAP2菌液的质粒DNA,与植物表达载体pGNP的质粒DNA同时用限制性内切酶BstXI和KpnI进行酶切,用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测并分别切胶纯化回收AtPAP2目的片段和pGNP载体的大片段(图4)。利用T4....

图4 载体pMD18-AtPAP2双酶切产物

作为植物类黄酮合成途径的一个分支途径,花青素的生物合成已经在模式植物中进行了较多研究。研究结果表明花青素合成的前体物质是苯丙氨酸,在一系列基因的调控下,苯丙氨酸经过一系列酶促反应最终形成花青素。为了研究拟南芥AtPAP2基因在烟草植株中的表达情况,该研究提取了转基因烟草叶片的总R....

本文编号：4026048