滚环复制放大技术在肿瘤细胞检测及分子逻辑门体系中的应用研究

发布时间：2021-08-20 09:12

　　随着生存环境的不断恶化,肿瘤和金属离子污染已经严重威胁到人类的健康。化学发光分析法因其操作方便、灵敏度高、设备简单等优点,受到越来越多科研工作者的广泛关注。本论文研制了两种新型适体生物传感器,分别应用于肿瘤细胞的高灵敏度检测和微量金属离子的检测,本文所建立的方法具有高选择性、高灵敏度等优点,在环境保护、临床研究、体外诊断等方面具有十分广泛的应用前景。本论文主要研究内容如下：一、金属离子触发滚环复制放大反应以及它在分子逻辑门体系中的应用Hg2+能使错配的T-T碱基对形成稳定的T-Hg2+-T碱基对,Ag+能使错配的C-C碱基对形成稳定的C-Ag+-C碱基对,这些特性为用于金属离子检测的分子机器的组装和逻辑门体系的执行提供了一种新型通用的技术平台。首先,将探DNA与引物DNA杂交,然后,加入Hg2+或Ag+,在连接酶的作用下将模板DNA连接成环,然后在DNA聚合酶和dNTPs作用下进行滚环复制放大反应,用标记有荧光素的分子信标与滚环复制的产物杂交,连接上大量的信号探针,大大增强了产物的荧光信号,实现了对Hg+、Ag+金属离子的高灵敏度检测,同时,由于Hg2+、Ag+与T-T、C-C碱基对之... 

【文章来源】：青岛科技大学山东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1 生物传感器
        1.1 生物传感器概述
            1.1.1 生物传感器的组成与检测原理
            1.1.2 生物传感器的定义与分类
            1.1.3 生物传感器的特点
            1.1.4 生物传感器的应用研究
        1.2 细胞传感器
            1.2.1 细胞传感器的种类与应用
            1.2.2 传统细胞检测技术
            1.2.3 细胞传感器的发展方向
    2 滚环扩增
        2.1 滚环DNA扩增的概念
        2.2 滚环DNA扩增的原理
        2.3 滚环扩增体系应用研究进展
            2.3.1 滚环扩增在核酸测序中的应用
            2.3.2 滚环扩增在蛋白质芯片中的应用
            2.3.3 滚环扩增在DNA芯片中的应用
        2.4 滚环扩增的发展前景
    3 核酸适体探针检测肿瘤细胞的研究
        3.1 核酸适体探针的筛选-SELEX技术
            3.1.1 SELEX的概念
            3.1.2 SELEX的技术原理
            3.1.3 SELEX技术的发展
        3.2 核酸适体探针在肿瘤诊断和治疗中的应用
            3.2.1 在肿瘤诊断中的应用
            3.2.2 在肿瘤治疗中的应用
    4 本论文的研究目的和内容
第二章 滚环复制放大技术在分子逻辑门体系中的应用
    1 引言
    2 实验部分
        2.1 试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 仪器装置
        2.2 试验方法
            2.2.1 YES和NYES逻辑门中Hg~(2+)的检测
            2.2.2 金属离子检测的选择性
            2.2.3 AND逻辑门
            2.2.4 OR、INHIBIT、XOR逻辑门
            2.2.5 NAND、NOR、NXOR逻辑门
    3 结果与讨论
        3.1 方法的灵敏性-不同浓度Hg~(2+)的测定
        3.2 方法的灵敏性-不同浓度Ag~(2+)的测定
        3.3 金属离子的选择性
        3.4 AND逻辑门
        3.5 OR、INHIBIT、XOR逻辑门
        3.6 NAND、NOR、NXOR逻辑门
    4 小结
第三章 滚环复制放大技术在肿瘤细胞检测中的应用
    1 引言
    2 实验部分
        2.1 试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 仪器装置
        2.2 试验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 AuNPs的合成
            2.2.3 亲和素修饰的酶标板的制备
            2.2.4 核酸适体探针的制备
            2.2.5 luminol-H_2O_2-HRP-PIP发光体系反应时间的选择
            2.2.6 各组分的紫外可见吸收光谱性质
            2.2.7 方法的灵敏性——不同个数Ramos细胞的测定
            2.2.8 Ramos细胞检测的选择性
    3 结果与讨论
        3.1 实验原理
        3.2 AuNPs的表征
        3.3 luminol-H_2O_2-HRP-PIP发光体系反应时间的选择
        3.4 各组分的紫外可见吸收光谱性质
        3.5 方法的灵敏性—不同数量的Ramos细胞的测定
        3.6 方法的选择性
    4 小结
结论
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]生物传感器在医疗领域的应用[J]. 刘向阳.  医疗保健器具. 2008(02)
[2]细胞芯片的研究进展[J]. 顾军,刘作易,张春秀,唐祖明,陆祖宏.  细胞与分子免疫学杂志. 2007(03)
[3]生物传感器的研究进展综述[J]. 陈玲.  传感器与微系统. 2006(09)
[4]RCA技术的应用及研究进展[J]. 李启明,马学军.  中华实验和临床病毒学杂志. 2006(02)
[5]滚环扩增原理及其在医药领域的应用[J]. 乔婉琼,周东蕊,杨耀,陆祖宏.  中国药科大学学报. 2006(03)
[6]一种耐高压光纤布拉格光栅压力传感器[J]. 刘钦朋,乔学光,贾振安,王向宇,李婷.  激光与红外. 2006(06)
[7]纳米级PEBBLE传感器研究进展[J]. 田臻锋,郭茂田,陈兴科,王慧,王世明,张荣兰.  微纳电子技术. 2005(01)



本文编号：3353230