静电沉积法制备口服胰岛素微球

发布时间：2018-04-17 10:03

本文选题：胰岛素 + 微球　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:胰岛素(insulin,INS)是一种生物大分子蛋白,在临床上用于治疗1型糖尿病和口服降糖药无效的2型糖尿病。胰岛素直接口服生物利用度极低,皮下注射是目前主要的给药方式,但是长期频繁的注射胰岛素给患者带来许多痛苦与不便,顺应性差。本文采用静电沉积技术制备一种新型的口服胰岛素微球(insulin-loaded microspheres,INS-MP),并对其进行质量评价、稳定性研究和降血糖作用考察,以提高胰岛素口服的药效。方法:1 INS-MP的制备:采用溶剂挥发法制备空白微球作为载体,通过阴阳离子静电沉积技术在载体表面多层沉积由聚乙烯硫酸根阴离子和胰岛素阳离子组成的薄膜层,直至所需的包封层数,来制备INS-MP。通过单因素考察确定对INS-MP载药量影响较大的实验因素,对这些实验因素每个因素选取3个水平进行正交实验,以载药量为主要指标,来优化制备工艺;同时,以最优工艺制备3批INS-MP,以载药量为主要指标来评价工艺的重现性。2 INS-MP的鉴定方法:通过对空白微球和INS-MP分别进行扫描电镜观察以及粒径测定,对比其形态观察和粒径测定结果来鉴定INS-MP的形成。3 INS-MP的质量评价:建立胰岛素的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定INS-MP的载药量和包封率,并进行方法学考察。以最优工艺制备不同薄膜沉积层数(5、10、15)的INS-MP,并分别测定微球的载药量和包封率,考察其载药量和包封率与沉积薄膜层数的关系。4 INS-MP的溶出度实验和稳定性考察:将INS-MP分别置于p H1.0的HCl溶液和p H6.8的磷酸盐缓冲溶液中,用溶出度仪进行微球溶出实验,HPLC法测定其不同时间点胰岛素的浓度,计算累积释放率;另将INS-MP分别储存在不同条件(25℃室温、4℃冷藏)下,于不同时间点(1、3、6个月)取样,测定其载药量和粒径,来评价ins-mp的放置稳定性。5ins-mp的降血糖作用及效果:以腹腔注射链脲霉素的方法,建立1型糖尿病大鼠模型;将模型大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和口服ins-mp低、中、高剂量实验组,分别测定给药前和给药后不同时间点各组大鼠的血糖值变化,评价ins-mp的降血糖作用和效果。结果:1由单因素考察结果可知,选择加入空白微球的质量(a)、加入溶液的体积(b)和离心的速度(c)3个因素进行工艺优化。每个因素3个水平按正交表l9(34)进行正交实验,得最佳制备条件为加入空白微球25mg、加入溶液体积0.8ml和离心速度6000r/min。以载药量为主要指标评价ins-mp最佳制备工艺重现性可知,工艺重现性良好。2用扫描电镜和粒度仪对ins-mp的形成进行鉴定。扫描电镜结果显示,最佳工艺条件下制得的空白微球和ins-mp均外观圆整、大小均匀,ins-mp较空白微球表面粗糙;粒度仪测定结果显示,空白微球和ins-mp的粒径分别为(3.6±0.46)μm和(5.25±0.15)μm,ins-mp较空白微球粒径明显增大,且粒径符合微球的要求。表明ins-mp制备成功。3建立了胰岛素的hplc测定方法。方法学考察结果显示,在20~100μg/ml范围内胰岛素的浓度与峰面积呈良好的线性关系,专属性、回收率、精密度和稳定性均符合方法学要求。通过制备不同薄膜沉积层数的ins-mp并测定其载药量与包封率可知,载药量与薄膜沉积层数正相关,而包封率与薄膜沉积层数负相关,本制剂可以通过改变胰岛素薄膜包封层数来调节ins-mp的载药量。4ins-mp溶出度测定结果显示,ins-mp在ph1.0的hcl溶液中十分稳定;而在ph6.8的磷酸盐缓冲溶液中ins-mp会缓慢释放出胰岛素,6h的累积释放量将近90%。ins-mp放置在不同条件下载药量和粒径的变化结果显示,4℃冷藏条件下放置6个月后ins-mp的载药量与粒径均无明显变化,微球相对稳定;而25℃室温放置条件下ins-mp的载药量与粒径变化较大,微球稳定性较4℃冷藏条件下差。因此,ins-mp应在4℃冷藏条件下保存,6个月内相对稳定。5 INS-MP降血糖作用结果显示,通过腹腔注射链脲霉素成功建立了稳定的1型糖尿病大鼠模型;与空白和阴性对照组相比,模型大鼠口服等剂量的INS-MP后有显著的降血糖作用,差异有统计学意义(P0.05),降血糖的峰值在2 h左右,并且降血糖效果随微球剂量增加而越加明显。结论:本文通过阴阳离子静电沉积技术制备得到了一种新型的口服INS-MP,其质量优良,稳定性好,制备条件温和并且载药量可通过改变薄膜沉积层数来调节。糖尿病模型大鼠口服INS-MP后起到了剂量依赖性降血糖作用。这为蛋白类药物口服制剂的研制提供了一种新的方法与思路。
[Abstract]:Aim : Insulin ( INS ) is a kind of biological macromolecular protein , it is used in the treatment of type 2 diabetes mellitus which is not effective in type 1 diabetes and oral hypoglycemic drugs . Compared with blank and negative control group , there was a significant effect of lowering blood glucose after oral administration of INS - MP in model rats .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R943

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