茎菜类植物中黄酮成分的提取解析

发布时间：2017-10-25 07:25

  本文关键词：茎菜类植物中黄酮成分的提取解析

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【摘要】：本文以芹菜和花椰菜为研究对象,利用加速溶剂萃取法(ASE)及大孔吸附树脂对其所含黄酮进行提取和纯化,建立了HPLC-ESI-MSn分离鉴定黄酮的方法,并对芹菜和花椰菜中的黄酮进行了鉴定。通过单因素和正交实验,确定了芹菜黄酮的最佳提取工艺条件：预热时间：5 min,静态萃取时间：5 min,萃取压力：10.3 MPa,萃取温度：90℃,萃取剂：80%乙醇水溶液,冲洗体积：60%,N2吹扫时间：60s,循环3次。研究了大孔树脂纯化芹菜黄酮的工艺条件,通过比较AB-8型、D101型、D4020型和NKA-9型4种树脂对芹菜黄酮的吸附、解吸附性能,最终选择D101型大孔树脂纯化芹菜黄酮,工艺条件为：黄酮上样量与所用干树脂的比例约为1.4 mg/g,洗脱剂：80%乙醇水溶液,收集4倍柱体积(BV)的洗脱溶液。实验优化了液相色谱部分和质谱部分的各项仪器参数,建立了黄酮的液相色谱质谱联用分离鉴定方法。色谱柱型号为ZORBAX Eclipse XDB-C18(2.1 mm×150 mm,3.5 μm Agilent)；柱温为40℃；流速为0.2 mL/min:流动相为甲醇(B)和含0.1%甲酸的水(A)；梯度洗脱条件如下：0-20 min 20%-30%B;20-30 min 30%-40%B；30-55 min 40%-55%B；55-65 min 55%B；65-66 min 55%-20%B；66.76 min 20%B,二极管阵列检测器(PDA)全扫描波长为230-500 nm。离子源为ESI源；金属毛细管温度为300℃；金属毛细管电压为-15V；电喷雾电压为4.5 kV；鞘气流速为30 arb；辅助气流速为5 arb。芹菜叶、芹菜茎和花椰菜叶黄酮的提取量分别为14.53 mg/g,1.80 mg/g,6.35 mg/g。经过D101大孔树脂纯化的黄酮粉末的纯度为66.42%,而未经大孔树脂纯化的黄酮粉末的纯度为25.03%。加标回收率在95%-108%的范围内。根据黄酮标准品在高效液相色谱中的保留时间、质谱裂解规律和多级质谱碎片信息等,本试验从芹菜中鉴定出14种黄酮,从花椰菜中鉴定出9种黄酮,为芹菜和花椰菜的深加工奠定了基础并提供了理论支持。
【关键词】：茎菜 黄酮 提取 解析 LC-MS
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q946
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-15
• 1.1 茎菜类植物基本概述8
• 1.1.1 茎菜类植物介绍8
• 1.1.2 茎菜类植物深加工8
• 1.2 黄酮的基本概述8-10
• 1.2.1 黄酮的结构和种类8-9
• 1.2.2 黄酮在自然界的分布9
• 1.2.3 黄酮的物理化学性质9
• 1.2.4 黄酮的生理功能9-10
• 1.3 黄酮的提取、纯化和分离鉴定方法10-13
• 1.3.1 黄酮类化合物的提取方法10-11
• 1.3.2 黄酮类化合物的纯化方法11-12
• 1.3.3 黄酮类化合物的鉴定方法12-13
• 1.4 液质联用技术13
• 1.4.1 概述13
• 1.4.2 液质联用在天然产物结构分析中的应用13
• 1.5 本论文研究内容及研究意义13-15
• 2 材料与方法15-23
• 2.1 实验药品15
• 2.2 实验仪器及材料15-16
• 2.3 实验样品16
• 2.4 试剂的配制16-17
• 2.4.1 黄酮标准贮备液的配制16
• 2.4.2 黄酮标准工作液的配制16-17
• 2.5 样品前处理方法17
• 2.6 实验条件17-22
• 2.6.1 优化仪器实验条件17
• 2.6.2 黄酮含量的测定17-18
• 2.6.3 黄酮提取方法及条件的确定18-19
• 2.6.4 黄酮纯化技术的研究19-22
• 2.6.5 黄酮标准品的质谱分析22
• 2.6.6 芹菜和花椰菜中黄酮成分的分析22
• 2.7 HPLC-MS方法学考察22
• 2.8 分析方法的线性关系和最低检测限22-23
• 3 结果与讨论23-62
• 3.1 黄酮分离鉴定条件的优化23-31
• 3.1.1 质谱条件的优化23-26
• 3.1.2 液相条件的优化26-31
• 3.2 黄酮含量的测定31
• 3.3 黄酮提取方法及条件的确定31-35
• 3.3.1 提取条件的优化31-35
• 3.3.2 提取方法学考察35
• 3.4 黄酮纯化技术的研究35-38
• 3.4.1 大孔树脂的筛选35
• 3.4.2 D101型大孔树脂纯化工艺考察35-37
• 3.4.3 大孔树脂分离纯化芹菜叶总黄酮的验证试验37
• 3.4.4 加标回收率实验37-38
• 3.5 黄酮标准品的质谱分析38-50
• 3.5.1 一级质谱分析38-43
• 3.5.2 多级质谱解析43-50
• 3.6 芹菜和花椰菜中黄酮成分的分析50-59
• 3.6.1 芹菜中黄酮成分的分析51-55
• 3.6.2 花椰菜叶中黄酮成分的分析55-59
• 3.7 HPLC-MS方法学考察结果59-60
• 3.8 分析方法的线性关系和最低检测限60-62
• 4 结论62-63
• 5 展望63-64
• 6 参考文献64-72
• 7 论文发表情况72-73
• 8 致谢73-74
• 附录74

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本文编号：1092686