猪卵原干细胞体外分离、建系及其功能研究

发布时间：2017-12-29 00:25

  本文关键词：猪卵原干细胞体外分离、建系及其功能研究　出处：《内蒙古大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 猪 卵原干细胞 Fragilis 卵母细胞 干细胞

【摘要】：我们采取初情期的内蒙古白猪卵巢,用胶原酶对皮质组织消化处理,制备卵巢皮质组织单细胞悬液,再通过差速贴壁和抗体-磁珠分选法结合的方法富集卵原干细胞。在本实验中,我们采用的分选靶蛋白为Fragilis,最后将富含卵原干细胞的细胞悬液置于含有血清、EGF、BFGF、LIF的培养液中,在38.5℃、5%CO2的环境下培养,并对获得的卵原干细胞进行生物学特性验证。在培养5-7天后,出现卵原干细胞克隆,以后每隔2-3天传代一次,现在该细胞系在体外已经传代56代,猪卵原干细胞的克隆细胞与小鼠卵原干细胞的形态相似,细胞界限清晰,核质比大,体外传代次数超过6代后,小部分的卵原干细胞开始自发分化,细胞的体积增大,其直径可达60μm,形成卵母细胞样细胞,并且在卵母细胞样细胞外周形成透明带样结构,免疫荧光分析显示该结构与ZP3蛋白的抗体特异结合,免疫荧光染色显示这类细胞表达Scp3蛋白,表明这些卵母细胞样细胞处于减数分裂期。经免疫荧光检测、RT-PCR基因表达分析结果显示猪卵原干细胞表达Oct4、DDX4、C-kit、Nanog、Stella、Ifitm3、Blimp1等干细胞标记基因。核型分析显示我们建立的猪卵原干细胞系含有38条染色体,其中2条为XX性染色体。以上结果表明该细胞系具有卵原干细胞的全部特性,证明我们在体外成功构建了猪卵原干细胞系。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q813.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 张传茂;;细胞分化 中国科学家谈科学[J];科学观察;2007年06期

2 《世界科学前沿发展态势分析》课题组;张望;;细胞分化 数据聚焦分析[J];科学观察;2007年06期

3 许智宏;;第十讲 植物的细胞分化[J];植物生理学通讯;1979年03期

4 利容千;植物细胞学专题讲座——第六讲 植物的细胞分化及其实践应用[J];湖北农业科学;1980年12期

5 张乃群，赵丽英;植物细胞分化的研究综论[J];南都学坛;1996年06期

6 杜玲;影响细胞分化的因素[J];生物学教学;2003年05期

7 David　Tenenbaum,饶新华;细胞之源[J];世界科学;2000年11期

8 闫贵新;干细胞研究的重大进展[J];畜牧兽医科技信息;2000年11期

9 赵志力;修复细胞分化的调控机制与鉴别[J];中国危重病急救医学;2002年02期

10 黄绍勤;曹惠珍;;生命的基本单位——细胞[J];广医通讯;1980年03期

相关会议论文 前10条

1 徐志彦;;《细胞分化》教学案例(教学内容安排1课时)[A];河北省教师教育学会第二届中小学教师教学案例展论文集[C];2013年

2 尹青;张雷;李莉;谢丹丹;龚淼;;体外心肌样环境对P19细胞向心肌细胞分化的诱导作用[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

3 丁建东;;图案化表面与干细胞分化[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——大会邀请报告[C];2013年

4 陈思;黄欣;陈少华;杨力建;郑海涛;李扬秋;;BCL11B基因在T细胞分化和增殖中调节作用的研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

5 江键;崔黎丽;宋诚荣;王小平;宋茂海;;负极性驻极体诱导3T3细胞表面电荷和游离钙浓度的变化[A];第四届中国功能材料及其应用学术会议论文集[C];2001年

6 梁冀;于会梅;傅继东;郭昂;杨黄恬;;内质网钙离子释放受体对干细胞分化的调控[A];中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2010年

7 罗家江;;TH17细胞的研究进展[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

8 项盈;金洁;沈丹;郑强;谢纯刚;贾冰冰;黄国平;王金福;;复苏的人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向多系细胞分化的诱导[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余华军;符竣惠;徐启纲;曾其强;吴建波;张启瑜;;三种全肝脏去细胞化流程对细胞外基质的影响及细胞组分残留量的研究[A];2013年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2013年

10 常平安;陈瑞;李薇;伍一军;;神经病靶标酯酶的增强表达抑制哺乳动物细胞的增殖[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年

相关重要报纸文章 前10条

1 徐荣祥;人类生命细胞 再生物质的发现与研究[N];健康报;2007年

2 张佳星;干细胞分化路径存在差异性[N];中国矿业报;2008年

3 史军;剥开黏合的细胞之书[N];健康报;2012年

4 常丽君;美生物学家打造出“细胞黑客”[N];科技日报;2010年

5 张佳星;分化之路 殊途同归[N];科技日报;2008年

6 记者 施嘉奇　通讯员 王姿英;探索中药对干细胞分化的作用[N];文汇报;2009年

7 记者陈超;日开发细胞间隔离培养技术[N];科技日报;2003年

8 陈超;科学家发现引发细胞分化的分子通道[N];科技日报;2010年

9 记者 白毅;我国科学家用iPS细胞首获克隆猪[N];中国医药报;2013年

10 记者 钱铮;日本用人类iPS细胞首次制成血小板[N];新华每日电讯;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 唐绍灿;IL-27、Th1及Th17细胞在MS中的表达及其作用机制研究[D];山东大学;2015年

2 常凯凯;子宫内膜异位灶微环境IL-10~+Th17细胞的形成及作用机制[D];复旦大学;2014年

3 高华嵩;细胞重编程技术和移植治疗视神经损伤的实验研究[D];复旦大学;2014年

4 李艳明;Hsa-miR-200a调控红细胞分化的功能及分子机制研究[D];中国科学院北京基因组研究所;2015年

5 张林;C-反应蛋白通过对T细胞分化的直接调控参与后天免疫应答[D];兰州大学;2015年

6 蒋云秋;树突状细胞Notch信号在1，25-二羟维生素D3调节Th17分化中的作用研究[D];第三军医大学;2015年

7 史莉瑾;急性脑出血患者外周血调节性T细胞与脑相关抗原的特征及其相关性研究[D];郑州大学;2015年

8 陈博;可注射细胞微球明胶复合物联合血小板裂解液在牙组织工程中的应用研究[D];第四军医大学;2015年

9 章丽雅;血红素加氧酶-1调抑Th17细胞在炎症性肠病中的作用及机制研究[D];上海交通大学;2013年

10 曹际森;miR-146a调控Treg细胞抑制小鼠心脏移植免疫排斥的研究[D];天津医科大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 丁佳敏;芪蓝制剂对人舌鳞癌Tca8113细胞的抗增殖和促凋亡作用的机制研究[D];福建医科大学;2015年

2 张卓亚;间充质干细胞对B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠滤泡辅助T细胞的调节作用及机制研究[D];南京大学;2015年

3 周明;As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂影响肝癌HepG_2细胞耐药性的研究[D];石河子大学;2015年

4 刘冰慧;凋亡细胞对巨噬细胞IL-12家族细胞因子调控的研究[D];河北医科大学;2015年

5 韩青青;Th22细胞及其效应因子IL-22与类风湿关节炎及合并间质性肺病相关性的研究[D];河北医科大学;2015年

6 张腾飞;吉西他滨与AMD3100联合应用于胆管癌RBE细胞株对CXCR4/CXCL12轴的作用[D];河北医科大学;2015年

7 王們X ;EAAL细胞联合全反式维甲酸对人肺腺癌细胞株A549体内外作用的研究[D];河北医科大学;2015年

8 李超楠;两种典型OPFRs对PC12细胞的神经毒性及其机制探究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

9 杨明;促肾上腺皮质激素释放因子1型受体经cAMP/PKA信号通路对U87MG细胞凋亡机制的研究[D];河北医科大学;2015年

10 李广康;RNAi沉默Rap2B基因对恶性转化BEAS-2B细胞的作用[D];郑州大学;2015年

，

本文编号：1348061