牛脾脏抗菌肽BSN27的分离、纯化及活性分析

发布时间：2017-12-29 01:10

  本文关键词：牛脾脏抗菌肽BSN27的分离、纯化及活性分析　出处：《河南科技学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)是广泛分布于生物体内,能够抑制细菌、真菌、原生动物以及某些病毒等具有广谱抗菌活性的一类生物小分子(10k Da)多肽。哺乳动物的脾脏具有多种生物学功能,其中包括分泌多种多肽类活性物质,参与机体免疫反应。本研究旨在从荷斯坦牛的脾脏中分离纯化出新型抗菌肽,多肽合成后对其抗菌活性进行检测,从而筛选出活性较强的抗菌肽。这项研究可为牛脾脏源抗菌肽的相关研究奠定基础。本试验通过无菌操作方法获得牛脾脏,运用组织匀浆、超声破碎、乙酸浸提和高速离心方法获得脾脏粗提物,后经阳离子交换层析和反向高效液相色谱(RP-HPLC)对粗提物进行分离、纯化,用大肠杆菌(ATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)作为抗菌活性试验的指示菌株,获得了一个抑菌活性较强的抗菌肽。经MALDI-TOF-MS质谱鉴定和序列比对分析得出,得到该抗菌肽的氨基酸序列,将其命名为BSN27。通过抗菌肽数据库APD3的分析表明,BSN27有27个氨基酸残基,由5种氨基酸构成,缬氨酸(Ile,I)占14%(4个),苯丙氨酸(Phe,F)占11%(3个),脯氨酸(Pro,P)占51%(14个),酪氨酸(Tyr,Y)占3%(1个),精氨酸(Arg,R)占18%(5个);带净电荷数为+5;总疏水率为25%,GRAVY值为-0.7333,表明其为亲水多肽;因富含脯氨酸(P),BSN27可能是一种抗菌肽;与抗菌肽牛Bac5、新西兰鹿P9、绵羊Oa Bac5、山羊Ch Bac5和猪SP-B的同源性分别为62.79%、60%、55.81%、53.48%和50%。利用多肽合成仪合成牛脾脏抗菌肽BSN27,进行抗菌活性检测。结果表明,合成抗菌肽BSN27除对大肠杆菌(ATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)有很好抑菌效果。
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【学位授予单位】：河南科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q51
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本文编号：1348181