番茄斑萎病毒和水稻黑条矮缩病毒CP和RdRp的转基因烟草构建

发布时间：2018-01-01 18:21

  本文关键词：番茄斑萎病毒和水稻黑条矮缩病毒CP和RdRp的转基因烟草构建　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科作物,引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等病害。其基因组有10条双链RNA(S1-S10),S1编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),S10编码外壳蛋白(CP)。番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)能够侵染70科900多种植物,病害在世界范围内都有分布。其基因组包括三条单链RNA(L、M和S);RNA L为负义RNA,其互补链编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),RNA S为双义RNA,其互补链编码核衣壳蛋白(N)。这两种病害均可造成严重的生产危害和经济损失,为进一步对这两种RNA病毒进行分子生物学水平研究,本研究旨在构建含有TSWV和RBSDV CP和RdRp蛋白的转基因烟草,尝试建立其反向遗传学体系。基于双元载体pROKⅡ,构建了分别含有RBSDV和TSWV CP和RdRp的pROKⅡ-TS-CP、pROKⅡ-TS-CP-8H、pROKⅡ-RB-CP、pROKⅡ-RB-CP-8H、pROKⅡ-TSRdRp、pROKⅡ-TS-RdRp-8H、pROKⅡ-RB-RdRp、pROKⅡ-RB-RdRp-8H等8个不带His标签或带His标签的转基因载体。采用农杆菌介导的叶盘法分别将8个载体转化普通烟(Nicotiana tabacum,NC89),普通烟叶片经过预培养、共培养、选择培养,筛选出抗性愈伤组织,将获得不定芽转入生根培养基获得完整的再生植株。通过DNA、RNA及蛋白水平检测表明,已得到含有TSWV CP(带有His标签)和RBSDV CP(带有His标签)的单价普通烟,其他单、双价转基因烟草正在培养和生长中。
[Abstract]:Rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) can infect gramineous crops such as rice, corn, wheat and so on. The genome contains 10 double-stranded RNAs S1-S10 / S1 encoding RNA dependent RNA polymerase (RdRp). Tomato spot wilt virus Tomato spotted wilt virus (TSWV) can infect more than 900 species of plants belonging to 70 families. The disease is distributed all over the world. RNA L is a negative RNAs, and its complementary chain encodes a RNA dependent RNA polymerase, RdRpSs, which is a double sense RNA. The complementary chain encodes nucleocapsid protein (RNA). These two diseases can cause serious damage to production and economic loss. Therefore, the molecular biological level of the two RNA viruses is further studied. The purpose of this study was to construct transgenic tobacco containing TSWV, RBSDV CP and RdRp proteins, and to establish its reverse genetic system. The pROK 鈪，

本文编号：1365666