芍药PlPP2Cs基因的克隆及对拟南芥的遗传转化
发布时间：2021-01-08 05:57
芍药（Paeonia lactiflora Pall.）是芍药科芍药属多年生草本花卉,在我国栽培历史悠久,是我国传统名花之一。由于芍药种子的上下胚轴双重休眠特性,芍药的育种和生产工作进展比较缓慢,导致芍药不能完全满足观赏花卉市场的需求。以芍药杂交种子（母本为‘粉玉奴’,父本为‘粉玉楼’）为试验材料,克隆得到了差异表达基因Pl PP2Cs的全长,对Pl PP2Cs基因在芍药种子萌发不同时期的表达情况进行分析,构建植物表达载体并对野生型拟南芥进行遗传转化,通过抗生素筛选获得具有抗性的拟南芥植株,并对其进行PCR分子鉴定。本研究的结果如下:（1）根据课题组前期获得的芍药种子萌发过程的转录组数据筛选出差异表达基因Pl PP2Cs,克隆得到了该基因的全长。Pl PP2C1基因ORF序列全长为1236bp,编码411个氨基酸。Pl PP2C2基因的ORF序列全长为1341bp,编码447个氨基酸。通过构建Pl PP2Cs蛋白系统进化树,得出Pl PP2C1与巨桉的PP2C蛋白之间亲缘关系最近。Pl PP2C2与葡萄、蓝果树的PP2C之间亲缘关系较近。Pl PP2C1和Pl PP2C2编码的蛋白质都...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究的技术路线
沈阳农业大学硕士学位论文191000bp→图2-1芍药种子总RNA的电泳检测Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸胀前，2：吸胀后，3：露白，4：根长3-4cm，5：根茎变红，6：长芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反转录合成cDNA的检测取10μlPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果表明，反转录合成的cDNA均能扩增出长度200bp左右，清晰明亮的条带，且无拖尾等现象（图2-2）。说明cDNA符合要求，可用于下一步试验。图2-2芍药种子cDNA的电泳检测Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的获得待PCR反应完毕后，对PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，扩增出1200bp左右的条带（图2-3、图2-4），对比分析可知与转录组数据中序列的长度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456
沈阳农业大学硕士学位论文191000bp→图2-1芍药种子总RNA的电泳检测Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸胀前，2：吸胀后，3：露白，4：根长3-4cm，5：根茎变红，6：长芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反转录合成cDNA的检测取10μlPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果表明，反转录合成的cDNA均能扩增出长度200bp左右，清晰明亮的条带，且无拖尾等现象（图2-2）。说明cDNA符合要求，可用于下一步试验。图2-2芍药种子cDNA的电泳检测Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的获得待PCR反应完毕后，对PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，扩增出1200bp左右的条带（图2-3、图2-4），对比分析可知与转录组数据中序列的长度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456
本文编号：2964050
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究的技术路线
沈阳农业大学硕士学位论文191000bp→图2-1芍药种子总RNA的电泳检测Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸胀前，2：吸胀后，3：露白，4：根长3-4cm，5：根茎变红，6：长芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反转录合成cDNA的检测取10μlPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果表明，反转录合成的cDNA均能扩增出长度200bp左右，清晰明亮的条带，且无拖尾等现象（图2-2）。说明cDNA符合要求，可用于下一步试验。图2-2芍药种子cDNA的电泳检测Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的获得待PCR反应完毕后，对PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，扩增出1200bp左右的条带（图2-3、图2-4），对比分析可知与转录组数据中序列的长度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456
沈阳农业大学硕士学位论文191000bp→图2-1芍药种子总RNA的电泳检测Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸胀前，2：吸胀后，3：露白，4：根长3-4cm，5：根茎变红，6：长芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反转录合成cDNA的检测取10μlPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果表明，反转录合成的cDNA均能扩增出长度200bp左右，清晰明亮的条带，且无拖尾等现象（图2-2）。说明cDNA符合要求，可用于下一步试验。图2-2芍药种子cDNA的电泳检测Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的获得待PCR反应完毕后，对PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，扩增出1200bp左右的条带（图2-3、图2-4），对比分析可知与转录组数据中序列的长度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456
本文编号：2964050
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/2964050.html
