肠膜明串珠菌SN-8胞外多糖分离纯化，结构鉴定及功能特性研究
发布时间：2021-08-20 18:02
肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）是乳酸菌中明串珠菌属的代表菌种,它不仅可用于发酵各种食品,而且分泌的胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）具有特殊的生理生化特征和生物活性,近年来备受关注。因此,研究以辽宁省自然发酵豆酱为研究对象,从中分离筛选出一株分高产胞外多糖的肠膜明串珠菌SN-8,并对其多糖进行分离,纯化,结构解析及功能特性分析,结果如下:1.试验从辽宁省阜新市采集的自然发酵豆酱中,利用粘度测量法和多糖含量测定,分离筛选到一株高产EPS的菌株。经形态学观察,生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定为肠膜明串珠菌（Leu.mesenteroides）,并将其命名为Leu.mesenteroides SN-8。2.将该菌珠接种于乳酸细菌产糖培养基DeMan Rogosa Sharp-sugar producing（MRS-S）中,28℃恒温培养48 h获得EPS发酵液。经离心,除蛋白,醇沉,透析,冷冻干燥得到粗多糖,其产量为2.42 g/L。进一步利用纯净水透析,葡聚糖凝胶过滤柱Sephadex G-100进行过滤层析,旋转蒸发浓缩...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株SN1-8在MRS培养基中(28℃)的生长曲线
沈阳农业大学硕士学位论文21图2-2菌株SN1-8在MRS培养基中(28℃)的生长曲线Fig.2-2GrowthcurveofthestrainSN-8culturedinMRS（28°C）2.3.516SrDNA序列同源性鉴定结果采用细菌基因提取试剂盒（Tiangen）提取菌株SN1-8的DNA基因组，通过PCR反应扩增菌株的16SrDNA序列，得到的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，结果如图2-3所示。DNA条带单一明亮，与DL2000DNAmarke:电泳结果比对，菌株的条带在500-1000bp之间。图2-3菌株的16SrDNAPCR扩增结果Fig.2-3Electrophoregramof16SrDNAamplificationproductsofSN1-8经与GenBank数据库比对，明串珠菌疑似菌株SN1-8与Leuconostocmesenteroides同源性为99.79%。应用Mega7.0.26软件中的Neighbor-Joining法构建系统发育树，最终结果如图2-4所示。所以，鉴定菌株SN1-8为Leu.mesenteroides.
22图2-4Neighbor-Joining法构建菌株SN1-8的16SrDNA系统发育树Fig.2-4UsingNeighbor-JoiningmethodtobuildPhylogenetictreeofSN1-8，basedon16SrDNAsequences因此，对菌株SN1-8进行进一步研究，并将其定名为LeuconostocmesenteroidesSN-8。2.3.6培养基优化结果2.3.6.1最佳碳源的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同碳源对菌株产糖情况影响见图2-5(A)，菌株能够利用蔗糖，岩藻糖，果糖，木糖和葡萄糖进行发酵产糖，其中，由图可知，当以蔗糖为碳源时，菌株产糖量最高，这可可能与菌株含有的某些产糖酶有关。因此确定蔗糖为最佳碳源。2.3.6.2最佳氮源的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同氮源对菌株产糖情况影响见图2-5(B)，菌株能够利用大豆蛋白胨，胰蛋白胨，酵母蛋白胨，蛋白胨进行发酵产糖，由于其分子量的不同，菌株对不同氮源的利用程度也不一样。其中，由图可知，当以蛋白胨为氮源时，菌株产糖量最高，因此确定蛋白胨为最佳氮源。2.3.6.3最佳磷酸盐的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同磷酸盐对菌株产糖情况影响见图2-5(C)，不同的磷酸盐对于菌株产糖的促进作用是不同的。菌株SN-8能够利用KH2PO4，NaH2PO4，Na2HPO4，K2HPO4进行发酵产糖，其中，由图可知，当以K2HPO4为磷酸盐进行发酵是时，菌株产糖量最高，因此确定K2HPO4为最佳磷酸盐。2产胞外多糖肠膜明串珠菌的分离和鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]Probiotics and allergic diseases[J]. Ahmet Zülfikar Akelma,Zekiye ?lke K?l?? Top?u. World Journal of Immunology. 2016(01)
[2]响应面法优化嗜热链球菌产胞外多糖的发酵条件[J]. 陈亚,梁琪,杨敏,张卫兵,张炎. 食品工业科技. 2016(09)
[3]乳酸菌胞外多糖的研究进展[J]. 童良琴,曲亚军,陈敏. 中国生物工程杂志. 2015(11)
[4]乳酸菌胞外多糖研究进展以及在食品工业中的应用[J]. 杨靖鹏,王静,张晓辉,樊明涛,丁欢,魏新元. 食品与发酵工业. 2016(01)
[5]产胞外多糖乳酸菌的筛选及抗氧化特性研究[J]. 张玉龙,胡萍,王金龙,廖乾伟. 中国酿造. 2015(10)
[6]乳酸菌胞外多糖的结构及益生功能研究进展[J]. 汪清美,赵丽平. 天津农业科学. 2015(05)
[7]乳酸菌胞外多糖生理功能及合成途径的研究进展[J]. 秦晓萌,张远森,柳陈坚,张昆林,杨恩. 食品工业科技. 2015(14)
[8]影响乳酸菌胞外多糖产量的因素[J]. 胡盼盼,宋微,单毓娟,杜明,张兰威. 食品科技. 2014(09)
[9]黑龙江传统发酵豆酱中乳酸菌的分离鉴定[J]. 武俊瑞,张苗,岳喜庆,李欣,乌日娜. 食品与发酵工业. 2014(03)
[10]乳酸菌胞外多糖生理功能的研究进展[J]. 霍思序,唐彦君,刘宁. 食品科技. 2013(09)
博士论文
[1]产胞外多糖乳杆菌的筛选及其多糖的分离、结构和生物活性研究[D]. 邵丽.江南大学 2015
[2]Paenibacillus elgii B69胞外多糖结构鉴定及生物合成途径研究[D]. 李欧.浙江大学 2014
[3]新型微生物多糖WL-26的结构与特性研究[D]. 贾薇.江南大学 2012
[4]微生物胞外多糖的结构及其抗氧化活性研究[D]. 郭守东.中国海洋大学 2010
[5]乳酸菌胞外多糖生物合成及生理功能特性的研究[D]. 顾瑞霞.东北农业大学 2000
硕士论文
[1]乳酸菌胞外多糖对发酵乳流变学特性的影响[D]. 刘乃齐.内蒙古农业大学 2018
[2]Viili中乳酸菌的分离及其胞外多糖的研究[D]. 刘晶.河北农业大学 2015
[3]四株不同生境来源微生物胞外多糖的研究[D]. 郭涛.中国海洋大学 2015
[4]乳酸菌胞外多糖化学组成的研究[D]. 张宁波.山西大学 2011
[5]利用肠膜明串珠菌发酵合成葡聚糖及动力学研究[D]. 董智芳.广西民族大学 2010
本文编号：3353971
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株SN1-8在MRS培养基中(28℃)的生长曲线
沈阳农业大学硕士学位论文21图2-2菌株SN1-8在MRS培养基中(28℃)的生长曲线Fig.2-2GrowthcurveofthestrainSN-8culturedinMRS（28°C）2.3.516SrDNA序列同源性鉴定结果采用细菌基因提取试剂盒（Tiangen）提取菌株SN1-8的DNA基因组，通过PCR反应扩增菌株的16SrDNA序列，得到的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，结果如图2-3所示。DNA条带单一明亮，与DL2000DNAmarke:电泳结果比对，菌株的条带在500-1000bp之间。图2-3菌株的16SrDNAPCR扩增结果Fig.2-3Electrophoregramof16SrDNAamplificationproductsofSN1-8经与GenBank数据库比对，明串珠菌疑似菌株SN1-8与Leuconostocmesenteroides同源性为99.79%。应用Mega7.0.26软件中的Neighbor-Joining法构建系统发育树，最终结果如图2-4所示。所以，鉴定菌株SN1-8为Leu.mesenteroides.
22图2-4Neighbor-Joining法构建菌株SN1-8的16SrDNA系统发育树Fig.2-4UsingNeighbor-JoiningmethodtobuildPhylogenetictreeofSN1-8，basedon16SrDNAsequences因此，对菌株SN1-8进行进一步研究，并将其定名为LeuconostocmesenteroidesSN-8。2.3.6培养基优化结果2.3.6.1最佳碳源的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同碳源对菌株产糖情况影响见图2-5(A)，菌株能够利用蔗糖，岩藻糖，果糖，木糖和葡萄糖进行发酵产糖，其中，由图可知，当以蔗糖为碳源时，菌株产糖量最高，这可可能与菌株含有的某些产糖酶有关。因此确定蔗糖为最佳碳源。2.3.6.2最佳氮源的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同氮源对菌株产糖情况影响见图2-5(B)，菌株能够利用大豆蛋白胨，胰蛋白胨，酵母蛋白胨，蛋白胨进行发酵产糖，由于其分子量的不同，菌株对不同氮源的利用程度也不一样。其中，由图可知，当以蛋白胨为氮源时，菌株产糖量最高，因此确定蛋白胨为最佳氮源。2.3.6.3最佳磷酸盐的确定将菌株SN-8接种到MRS培养基中，不同磷酸盐对菌株产糖情况影响见图2-5(C)，不同的磷酸盐对于菌株产糖的促进作用是不同的。菌株SN-8能够利用KH2PO4，NaH2PO4，Na2HPO4，K2HPO4进行发酵产糖，其中，由图可知，当以K2HPO4为磷酸盐进行发酵是时，菌株产糖量最高，因此确定K2HPO4为最佳磷酸盐。2产胞外多糖肠膜明串珠菌的分离和鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]Probiotics and allergic diseases[J]. Ahmet Zülfikar Akelma,Zekiye ?lke K?l?? Top?u. World Journal of Immunology. 2016(01)
[2]响应面法优化嗜热链球菌产胞外多糖的发酵条件[J]. 陈亚,梁琪,杨敏,张卫兵,张炎. 食品工业科技. 2016(09)
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[4]乳酸菌胞外多糖研究进展以及在食品工业中的应用[J]. 杨靖鹏,王静,张晓辉,樊明涛,丁欢,魏新元. 食品与发酵工业. 2016(01)
[5]产胞外多糖乳酸菌的筛选及抗氧化特性研究[J]. 张玉龙,胡萍,王金龙,廖乾伟. 中国酿造. 2015(10)
[6]乳酸菌胞外多糖的结构及益生功能研究进展[J]. 汪清美,赵丽平. 天津农业科学. 2015(05)
[7]乳酸菌胞外多糖生理功能及合成途径的研究进展[J]. 秦晓萌,张远森,柳陈坚,张昆林,杨恩. 食品工业科技. 2015(14)
[8]影响乳酸菌胞外多糖产量的因素[J]. 胡盼盼,宋微,单毓娟,杜明,张兰威. 食品科技. 2014(09)
[9]黑龙江传统发酵豆酱中乳酸菌的分离鉴定[J]. 武俊瑞,张苗,岳喜庆,李欣,乌日娜. 食品与发酵工业. 2014(03)
[10]乳酸菌胞外多糖生理功能的研究进展[J]. 霍思序,唐彦君,刘宁. 食品科技. 2013(09)
博士论文
[1]产胞外多糖乳杆菌的筛选及其多糖的分离、结构和生物活性研究[D]. 邵丽.江南大学 2015
[2]Paenibacillus elgii B69胞外多糖结构鉴定及生物合成途径研究[D]. 李欧.浙江大学 2014
[3]新型微生物多糖WL-26的结构与特性研究[D]. 贾薇.江南大学 2012
[4]微生物胞外多糖的结构及其抗氧化活性研究[D]. 郭守东.中国海洋大学 2010
[5]乳酸菌胞外多糖生物合成及生理功能特性的研究[D]. 顾瑞霞.东北农业大学 2000
硕士论文
[1]乳酸菌胞外多糖对发酵乳流变学特性的影响[D]. 刘乃齐.内蒙古农业大学 2018
[2]Viili中乳酸菌的分离及其胞外多糖的研究[D]. 刘晶.河北农业大学 2015
[3]四株不同生境来源微生物胞外多糖的研究[D]. 郭涛.中国海洋大学 2015
[4]乳酸菌胞外多糖化学组成的研究[D]. 张宁波.山西大学 2011
[5]利用肠膜明串珠菌发酵合成葡聚糖及动力学研究[D]. 董智芳.广西民族大学 2010
本文编号：3353971
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