小麦TaNCED3基因克隆及功能分析
发布时间：2022-10-30 10:58
小麦（Triticum aestivum.L）是世界上最重要的粮食作物之一,干旱、寒冷、高盐等非生物胁迫严重影响小麦的生长发育及产量,因此研究小麦等植物对于非生物胁迫的响应的调节机制是植物学重要研究课题之一。脱落酸（Abscisic acid,ABA）作为植物激素之一,参与植物许多生理过程的调控,尤其在响应非生物胁迫方面发挥重要作用,被称为胁迫激素。9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶（9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase,NCED）是ABA生物合成的关键酶。本研究从小麦叶片中分离到一个NCED基因,命名为TaNCED3。序列分析表明,TaNCED3基因的开放阅读框（ORF）长度为1887bp,编码628个氨基酸,在其编码蛋白的N端存在叶绿体转移肽序列。通过多序列比对,TaNCED3蛋白与其他物种的NCED蛋白具有很高的相似性。荧光实时定量实验结果表明,TaNCED3基因的转录受到外加甘露醇和ABA的诱导,显著上调,但对高盐和低温的诱导没有响应。在拟南芥中过量表达TaNCED3基因后,其ABA含量在正常生长状态及干旱胁迫条件下均显著增加。同野生型相比,转基因植...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 脱落酸的发现、生理功能及合成
1.1.1 ABA的发现
1.1.2 脱落酸的生理作用
1.1.3 ABA的生物合成
1.2 高等植物NCED基因的研究
1.2.1 NCED基因研究进展
1.2.2 模式植物拟南芥的NCED基因
1.2.3 NCED基因功能的研究
1.3 本研究的目的及意义
1.4 本研究的技术路线
2 TaNCED3基因的克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 实验试剂
2.1.4 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 小麦Total RNA提取
2.2.2 小麦Total RNA的纯化
2.2.3 反转录反应
2.2.4 小麦TaNCED3基因的PCR扩增
2.2.5 PCR扩增产物的纯化和回收
2.2.6 TaNCED3基因的克隆
2.2.7 小麦TaNCED3基因的序列分析
2.3 结果与分析
2.3.1 小麦Total RNA提取
2.3.2 TaNCED3基因的克隆
2.3.3 TaNCED3基因序列特征
2.3.4 小麦TaNCED3蛋白与其他植物NCED蛋白的氨基酸序列比对
2.4 讨论
3 TaNCED3基因表达特性分析
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 仪器设备
3.2 方法
3.2.1 材料处理
3.2.2 Total RNA提取及检测
3.2.3 反转录反应
3.2.4 荧光实时定量PCR反应
3.3 结果与分析
3.3.1 小麦胁迫处理样品Total RNA提取
3.3.2 胁迫条件下TaNCED3基因在小麦叶片中的表达
3.4 讨论
4 TaNCED3基因转化拟南芥及阳性植株的筛选
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株与载体
4.1.3 实验试剂
4.1.4 设备仪器
4.2 实验方法
4.2.1 植物表达载体构建
4.2.2 重组质粒转化农杆菌
4.2.3 拟南芥转化
4.2.4 阳性植株筛选及PCR鉴定
4.3 结果与分析
4.3.1 植物表达载体构建
4.3.2 转基因拟南芥的筛选
4.3.3 转基因拟南芥的鉴定
4.4 讨论
5 转基因拟南芥生理指标测定
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 实验试剂
5.1.3 设备仪器
5.2 方法
5.2.1 ABA含量测定
5.2.2 气孔导度和失水率测定
5.2.3 脯氨酸含量测定
5.3 结果与分析
5.3.1 ABA含量测定
5.3.2 气孔导度和失水率的测定
5.3.3 脯氨酸含量测定
5.4 讨论
6 转基因拟南芥抗旱鉴定及种子萌发率测定
6.1 实验材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 实验试剂
6.1.3 设备仪器
6.2 方法
6.2.1 转基因拟南芥耐旱性分析
6.2.2 种子萌发率分析
6.3 结果与分析
6.3.1 转基因拟南芥的耐旱性分析
6.3.2 种子萌发分析
6.4 讨论
结论
参考文献
附录A ：培养基配方
附录B ：DNA Makers
附录C ：载体图谱
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3698763
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 脱落酸的发现、生理功能及合成
1.1.1 ABA的发现
1.1.2 脱落酸的生理作用
1.1.3 ABA的生物合成
1.2 高等植物NCED基因的研究
1.2.1 NCED基因研究进展
1.2.2 模式植物拟南芥的NCED基因
1.2.3 NCED基因功能的研究
1.3 本研究的目的及意义
1.4 本研究的技术路线
2 TaNCED3基因的克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 实验试剂
2.1.4 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 小麦Total RNA提取
2.2.2 小麦Total RNA的纯化
2.2.3 反转录反应
2.2.4 小麦TaNCED3基因的PCR扩增
2.2.5 PCR扩增产物的纯化和回收
2.2.6 TaNCED3基因的克隆
2.2.7 小麦TaNCED3基因的序列分析
2.3 结果与分析
2.3.1 小麦Total RNA提取
2.3.2 TaNCED3基因的克隆
2.3.3 TaNCED3基因序列特征
2.3.4 小麦TaNCED3蛋白与其他植物NCED蛋白的氨基酸序列比对
2.4 讨论
3 TaNCED3基因表达特性分析
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 仪器设备
3.2 方法
3.2.1 材料处理
3.2.2 Total RNA提取及检测
3.2.3 反转录反应
3.2.4 荧光实时定量PCR反应
3.3 结果与分析
3.3.1 小麦胁迫处理样品Total RNA提取
3.3.2 胁迫条件下TaNCED3基因在小麦叶片中的表达
3.4 讨论
4 TaNCED3基因转化拟南芥及阳性植株的筛选
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株与载体
4.1.3 实验试剂
4.1.4 设备仪器
4.2 实验方法
4.2.1 植物表达载体构建
4.2.2 重组质粒转化农杆菌
4.2.3 拟南芥转化
4.2.4 阳性植株筛选及PCR鉴定
4.3 结果与分析
4.3.1 植物表达载体构建
4.3.2 转基因拟南芥的筛选
4.3.3 转基因拟南芥的鉴定
4.4 讨论
5 转基因拟南芥生理指标测定
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 实验试剂
5.1.3 设备仪器
5.2 方法
5.2.1 ABA含量测定
5.2.2 气孔导度和失水率测定
5.2.3 脯氨酸含量测定
5.3 结果与分析
5.3.1 ABA含量测定
5.3.2 气孔导度和失水率的测定
5.3.3 脯氨酸含量测定
5.4 讨论
6 转基因拟南芥抗旱鉴定及种子萌发率测定
6.1 实验材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 实验试剂
6.1.3 设备仪器
6.2 方法
6.2.1 转基因拟南芥耐旱性分析
6.2.2 种子萌发率分析
6.3 结果与分析
6.3.1 转基因拟南芥的耐旱性分析
6.3.2 种子萌发分析
6.4 讨论
结论
参考文献
附录A ：培养基配方
附录B ：DNA Makers
附录C ：载体图谱
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3698763
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3698763.html
