EGCG对甲状腺乳头状癌细胞的作用及其机制研究

发布时间：2017-12-20 02:33

  本文关键词：EGCG对甲状腺乳头状癌细胞的作用及其机制研究　出处：《江苏大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:本文旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对甲状腺乳头状癌细胞的作用,及其对凋亡、自噬和细胞氧化还原平衡调节的相关机制研究。方法:1.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1、甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1经不同浓度的EGCG(0、5、10、20、40μmol/L)处理24、48 h后,MTT法检测细胞增殖能力的变化,确定最佳EGCG作用时间及IC50(50%抑制浓度)值(经Graphpad软件计算EGCG IC50值约为17.2μmol/L)。2.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1经EGCG(0μmol/L)、3-MA(0.3 mmol/L)、EGCG(17.2μmol/L)、EGCG(17.2μmol/L)联合3-MA(0.3 mmol/L)共同作用48 h后,MTT法检测甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖能力以及凋亡水平的变化。3.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1经EGCG(0、17.2μmol/L)处理24 h后,PI染色,流式细胞术检测细胞周期的变化。4.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1经EGCG(0、17.2μmol/L)处理48 h后,流式细胞术检测细胞内ROS表达量的变化。5.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1经EGCG(0、17.2μmol/L)处理48 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt c、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP,以及自噬相关蛋白LC3B-II、p62表达量的变化。6.甲状腺乳头状癌细胞TPC-1经EGCG(0、17.2μmol/L)处理(0、15、30、60 min)后,Western blot检测p-AKT、p-mTOR、t-AKT、t-mTOR蛋白表达量的变化。结果:1.EGCG抑制甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的增殖,呈现时间和浓度依赖性(P0.001)。EGCG对正常甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1的增殖能力没有影响。2.与实验对照组相比,经EGCG(17.2μmol/L)处理后,甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的凋亡率明显增加(P0.01),ROS表达水平明显下降(P0.05)。凋亡相关蛋白Bax表达明显增加(P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降(P0.01),凋亡相关蛋白Cytc(P0.05)、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP表达明显上调(P0.05)。3.与实验对照组相比,经EGCG(17.2μmol/L)处理后,甲状腺乳头状癌细胞TPC-1出现明显的S期阻滞现象(P0.01)。同时细胞周期S期的相关蛋白cyclinA表达显著下降(P0.01),CDK2表达显著下降(P0.01)。4.与实验对照组相比,经EGCG(17.2μmol/L)处理后,甲状腺乳头状癌细胞TPC-1自噬相关蛋白LC3B-II表达明显增加(P0.01),P62表达明显下降(P0.05),自噬相关信号通路p-AKT、p-mTOR水平明显下调(P0.05)。自噬抑制剂3-MA(0.3mmol/L)联合EGCG(17.2μmol/L)处理后,与EGCG(17.2μmol/L)单独处理组相比,甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的增殖率显著下调(P0.05),同时凋亡率显著上调(P0.01)。结论:1.EGCG能够抑制甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的生长。2.EGCG能够下调甲状腺乳头状癌细胞TPC-1内ROS水平,并诱导甲状腺乳头状癌细胞TPC-1凋亡。3.EGCG能够促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1周期阻滞在S期。4.EGCG通过下调AKT/mTOR信号通路诱导甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的自噬。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R736.1

【参考文献】

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1 Shu-min LIU;Shi-yi OU;Hui-hua HUANG;;茶多酚对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制研究（英文）[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2017年02期

2 徐晓琴;韩存芝;张文丽;王艳;孙婷;田保国;荆结线;;2001年-2010年山西省肿瘤医院甲状腺癌住院患者分析[J];中国病案;2017年01期

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本文编号：1310457