线粒体融合蛋白2表达下调对于多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响
本文关键词：线粒体融合蛋白2表达下调对于多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响 出处：《江苏大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：背景多柔比星(Doxorubicin,DOX)是一种临床上广泛使用且效果显著的抗肿瘤药物,然而它的临床应用却受限于其心肌毒性,即能通过尚未明确的机制诱导心衰。线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)是一种横跨于线粒体外膜且具有GTP酶活性的蛋白,通过细胞内复杂的信息交流调控线粒体的融合过程。目的探索心肌细胞内Mfn2表达下调在多柔比星诱导的心肌细胞凋亡过程中的作用。方法本实验用的是培养的原代心肌细胞,来源于1到3天内出生的Sprague Dawley(SD)大鼠。建立多柔比星诱导的心肌细胞凋亡模型,实验组然后分为3组,DOX组和Mfn2转染处理组以及Mitotempo预处理组,以正常心肌细胞作为对照组,对照组不做任何处理,Mfn2转染组先在心肌细胞内转入Mfn2激活质粒然后再用DOX处理,Mitotempo预处理组先用Mitotempo预处理1小时然后再用DOX处理。用免疫蛋白印迹法(Western Blotting,WB)检测心肌细胞中Mfn2的表达。分别用DCFDA法和线粒体特异性荧光染料MitoSOX检测心肌细胞内和线粒体中的活性氧族成分(Reactive oxygen species,ROS)。通过检测心肌细胞内Caspase3的活性和TUNEL染色法两种手段来检测心肌细胞的凋亡。结果1.DOX诱导心肌细胞产生大量的ROS并且诱导了心肌细胞的凋亡。2.与此同时,在DOX的刺激下,心肌细胞中Mfn2含量的表达也随之下降。增加心肌细胞中Mfn2的表达可以抑制心肌细胞线粒体中有害活性氧成分的升高。3.增加心肌细胞内Mfn2的表达和使用线粒体特异性抗氧化剂Mitotempo均能够减少DOX诱导的心肌细胞凋亡。结论在DOX诱导的心肌细胞凋亡中,心肌细胞Mfn2的表达下调发挥了重要的作用,这一作用的实现与心肌细胞内损害性活性氧的产生有关;线粒体特异性抗氧化剂Mitotempo能抑制D0X诱导的心肌细胞凋亡。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96
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本文编号：1330188
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