miR-200c对TGF-β1诱导胃癌细胞株上皮间质转化的抑制作用
发布时间：2021-01-25 10:37
研究目的明确TGF-β1能否诱导胃癌细胞株EMT的发生;在EMT过程中,研究TGF-β1与miR-200c之间存在何种联系;最后观察miR-200c的表达与TGF-β1诱导的EMT的相关性。研究方法1.相同浓度TGF-β1诱导胃癌细胞株SGC-7901不同时间,Western-blot法检测EMT相关标志蛋白表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力;2.建立SGC-7901细胞EMT模型后,定量PCR技术检测TGF-β1对miR-200c表达量的影响;3.通过脂质体瞬时转染方式人为过表达miR-200c,并用TGF-β1进行诱导,显微镜观察胃癌细胞形态,Western-blot法检测EMT相关标志蛋白表达情况变化研究结果1.相同浓度TGF-β1（10ng/ml）诱导胃癌细胞0 h、12 h、24 h、36 h,Western-blot法结果显示:上皮标志蛋白E-cadherin表达随时间增加下降,间充质标志蛋白Vimentin表达随时间增加而增加,CCK-8法结果显示:TGF-β1处理组在0 h、12 h、24 h、36 h细胞增殖能力相比对照组也升高;胃癌EMT体外细胞模型建立成功。2...
【文章来源】： 韩博强 甘肃中医药大学
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜下观察TGF-β1刺激后上皮细胞形态变化（100×）
miR-200c对TGF-β1诱导胃癌细胞株上皮间质转化的抑制作用195.2TGF-β1诱导SGC-7901细胞株后，CCK-8实验检测细胞增殖能力变化利用CCK-8实验对细胞增殖能力进行检测，以CK为对照，发现TGF-β1处理SGC-7901细胞株12h、24h、36h时增殖细胞数明显多于CK组，其增殖能力显著上升，且36h时与CK组的差异最为明显（图2）。图2CCK-8实验检测细胞增殖能力（与0h对比，**P＜0.01）5.3TGF-β1诱导SGC-7901细胞株后，WB实验检测细胞中EMT相关分子的表达TGF-β1诱导刺激不同时间后行凝胶电泳，测定E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况，结果显示：以GAPDH蛋白为标准，随着诱导时间的增加E-cadherin蛋白的表达逐渐降低，而Vimentin蛋白的表达则逐渐升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明在分子蛋白水平TGF-β1促进了SGC-7901细胞的EMT，使细胞由上皮细胞表型向间质细胞表型发生改变（图3）。
miR-200c对TGF-β1诱导胃癌细胞株上皮间质转化的抑制作用20图3WB检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达（与CK组对比，＊＊示P<0.01）6.讨论肿瘤转移是恶性肿瘤相关死亡的主要原因，EMT被认为是肿瘤发生和转移的关键细胞过程，也是研究肿瘤转移的理想模型[19]。研究证实，在一些因素的作用下，上皮细胞极性丧失，细胞间黏附连接和紧密连接丢失，细胞因此获得了迁移性和浸润性，细胞表型也随之向间质细胞变化，这种改变被称之为EMT[20,21]。在EMT过程中，间充质样表型出现的可能原因为：细胞接触通过调控和表观遗传机制的共同作用而被破坏、细胞的极性取向受损以及肌动蛋白细胞骨架重新排列[22]。这提高了细胞迁移和入侵的能力，其不仅在发育过程中起着关键的作用，而且还参与组织愈合、器官纤维化和癌症发生等过程[23]。EMT在胃癌的发生、发展和转移过程中发挥重要作用。He等人[24]的研究表明EMT
【参考文献】：
期刊论文
[1]PI3K/AKT通路及miR-200c在胃癌上皮间质转化中的作用[J]. 李盖天,李洪涛,曹廷宝,魏登文,孔延龙,刘宏斌. 世界最新医学信息文摘. 2019(32)
本文编号：2999082
【文章来源】： 韩博强 甘肃中医药大学
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜下观察TGF-β1刺激后上皮细胞形态变化（100×）
miR-200c对TGF-β1诱导胃癌细胞株上皮间质转化的抑制作用195.2TGF-β1诱导SGC-7901细胞株后，CCK-8实验检测细胞增殖能力变化利用CCK-8实验对细胞增殖能力进行检测，以CK为对照，发现TGF-β1处理SGC-7901细胞株12h、24h、36h时增殖细胞数明显多于CK组，其增殖能力显著上升，且36h时与CK组的差异最为明显（图2）。图2CCK-8实验检测细胞增殖能力（与0h对比，**P＜0.01）5.3TGF-β1诱导SGC-7901细胞株后，WB实验检测细胞中EMT相关分子的表达TGF-β1诱导刺激不同时间后行凝胶电泳，测定E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况，结果显示：以GAPDH蛋白为标准，随着诱导时间的增加E-cadherin蛋白的表达逐渐降低，而Vimentin蛋白的表达则逐渐升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明在分子蛋白水平TGF-β1促进了SGC-7901细胞的EMT，使细胞由上皮细胞表型向间质细胞表型发生改变（图3）。
miR-200c对TGF-β1诱导胃癌细胞株上皮间质转化的抑制作用20图3WB检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达（与CK组对比，＊＊示P<0.01）6.讨论肿瘤转移是恶性肿瘤相关死亡的主要原因，EMT被认为是肿瘤发生和转移的关键细胞过程，也是研究肿瘤转移的理想模型[19]。研究证实，在一些因素的作用下，上皮细胞极性丧失，细胞间黏附连接和紧密连接丢失，细胞因此获得了迁移性和浸润性，细胞表型也随之向间质细胞变化，这种改变被称之为EMT[20,21]。在EMT过程中，间充质样表型出现的可能原因为：细胞接触通过调控和表观遗传机制的共同作用而被破坏、细胞的极性取向受损以及肌动蛋白细胞骨架重新排列[22]。这提高了细胞迁移和入侵的能力，其不仅在发育过程中起着关键的作用，而且还参与组织愈合、器官纤维化和癌症发生等过程[23]。EMT在胃癌的发生、发展和转移过程中发挥重要作用。He等人[24]的研究表明EMT
【参考文献】：
期刊论文
[1]PI3K/AKT通路及miR-200c在胃癌上皮间质转化中的作用[J]. 李盖天,李洪涛,曹廷宝,魏登文,孔延龙,刘宏斌. 世界最新医学信息文摘. 2019(32)
本文编号：2999082
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