沉默ARK5通过调节EMT途径降低结直肠癌的转移和侵袭性
发布时间：2021-03-27 04:27
目的:结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,既往有研究发现蛋白激酶相关激酶5（ARK5）可促进多种癌症的转移,并能增强癌症的侵袭性。而最近的证据支持上皮-间质转化（EMT）是肿瘤细胞转移的必经之路。在此次研究中,我们将进行探讨ARK5是否通过调节EMT途径来影响结直肠癌的转移和侵袭。方法:1.临床随机选取134名只接受根治性手术治疗未接受术前放化疗的结直肠癌患者（2013年1月至2014年1月）,获取134例患者的结直肠肿瘤组织和癌旁正常组织。通过免疫组织化学检测ARK5和上皮间质转化（EMT）相关标记物并评分。将评分与患者的临床分期、OS等相关数据进行统计学分析。2.设计针对ARK5基因与TWIST基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）序列及阴性对照（negative control,NC）序列,并完成对LV-ARK5-RNAi重组慢病毒载体、LV-TWIST-RNAi重组慢病毒载体和阴性重组慢病毒载体的构建。3.用携带荧光（GFP）的阴性重组慢病毒载体分别感染SW480及HT29细胞,通过荧光倒置显微镜观察并挑选最有效的感染条件。4.培养SW480,HT29两...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结直肠癌组织与癌旁正常组织中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫组织化学染色结果
结果图2ARK5重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h。图3TWIST重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h。3.3WesternBlot实验结果3.3.1ARK5慢病毒干扰SW480/HT29细胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表达情况为了进一步确认ARK5是否由调控EMT途径来改变结直肠癌细胞的侵袭及转移能力，本实验运用ARK5的重组慢病毒按预实验所测得的最佳MOI值及转染条件去转染SW480/HT29两株细胞，并提取各实验组的细胞蛋白，用凝胶电泳法测得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果显示（图4、表5）在SW480及HT29两株细胞中，均出现当ARK5被慢病毒阻止并下调后E-cadherin上调，Vimentin下调的情况。17
结果图2ARK5重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h。图3TWIST重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h。3.3WesternBlot实验结果3.3.1ARK5慢病毒干扰SW480/HT29细胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表达情况为了进一步确认ARK5是否由调控EMT途径来改变结直肠癌细胞的侵袭及转移能力，本实验运用ARK5的重组慢病毒按预实验所测得的最佳MOI值及转染条件去转染SW480/HT29两株细胞，并提取各实验组的细胞蛋白，用凝胶电泳法测得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果显示（图4、表5）在SW480及HT29两株细胞中，均出现当ARK5被慢病毒阻止并下调后E-cadherin上调，Vimentin下调的情况。17
【参考文献】：
期刊论文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文编号：3102884
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结直肠癌组织与癌旁正常组织中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫组织化学染色结果
结果图2ARK5重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h。图3TWIST重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h。3.3WesternBlot实验结果3.3.1ARK5慢病毒干扰SW480/HT29细胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表达情况为了进一步确认ARK5是否由调控EMT途径来改变结直肠癌细胞的侵袭及转移能力，本实验运用ARK5的重组慢病毒按预实验所测得的最佳MOI值及转染条件去转染SW480/HT29两株细胞，并提取各实验组的细胞蛋白，用凝胶电泳法测得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果显示（图4、表5）在SW480及HT29两株细胞中，均出现当ARK5被慢病毒阻止并下调后E-cadherin上调，Vimentin下调的情况。17
结果图2ARK5重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为20，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h。图3TWIST重组慢病毒转染SW480细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGP（40ul），时间为24h；转染HT29细胞的最佳MOI为60，感染体系为常规完全培养基+HiTransGA（40ul），时间为24h。3.3WesternBlot实验结果3.3.1ARK5慢病毒干扰SW480/HT29细胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表达情况为了进一步确认ARK5是否由调控EMT途径来改变结直肠癌细胞的侵袭及转移能力，本实验运用ARK5的重组慢病毒按预实验所测得的最佳MOI值及转染条件去转染SW480/HT29两株细胞，并提取各实验组的细胞蛋白，用凝胶电泳法测得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果显示（图4、表5）在SW480及HT29两株细胞中，均出现当ARK5被慢病毒阻止并下调后E-cadherin上调，Vimentin下调的情况。17
【参考文献】：
期刊论文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文编号：3102884
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