苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及作用机制研究
发布时间：2021-03-26 23:57
苦瓜为葫芦科苦瓜属植物苦瓜Momordica charantia Linnaeus的干燥近成熟果实,在我国又常被叫作锦荔枝、癫葡萄、凉瓜等,是传统的药食同源中药。《中华大辞典》记载苦瓜的根、茎、叶、花、果实、种子均可入药,《本草纲目》记载其可以解劳乏,除邪热,清心明目。味苦、寒,归心、脾、肝经,能够清暑涤热,明目,解毒。常被用于医治暑热烦渴,消渴,赤眼疼痛,痢疾,肠痈肿毒等。大量文献研究表明,苦瓜提取物能有效抑制肝癌细胞的生长,但其抗肝癌的药效物质基础目前还没有系统的研究报道。本论文在前期文献研究的基础上,通过多学科交叉的研究方法,对苦瓜醇提物进行分离纯化研究和有效成分分析,并对活性较好的组分进行了抗肝癌的作用机制研究。目的:诠释苦瓜醇提物抗肝癌作用的药效物质基础和作用机制,以期为其抗肝癌的临床疗效提供现代科学依据,为开发研制创新中药或抗肝癌保健食品奠定基础。方法:将新鲜苦瓜用乙醇提取,丙酮沉淀,得到苦瓜醇提物。以苦瓜中各活性成分的含量为指标,筛选出最佳的大孔吸附树脂对苦瓜醇提物进行初步纯化,利用液质联用技术（High performance liquid chromatograph-...
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大孔吸附树脂纯化部位的HPLC图谱
苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及其作用机制研究37游标卡尺吴江市亿丰电子仪器有限公司剪刀、镊子、注射器、细胞计数板、灌胃针等，其他仪器同第三章。2实验方法2.1H22荷瘤小鼠模型的建立[55-57]建模及给药过程如图1所示。H22肝癌细胞经复苏后注射到小鼠腹腔内进行培养，待7到10天左右小鼠腹水长成后，选取腹部饱满的小鼠，于无菌环境中从腹腔中抽取腹水，离心，除去血细胞，用生理盐水将H22细胞稀释至细胞浓度为2×107/ml，于每只小鼠左大腿根部皮下接种50μl，共接种32只，同时另取8只小鼠每只小鼠左大腿根部皮下接种50μl生理盐水。接种后5~7天，接种H22肿瘤细胞的左大腿根部肿瘤长至绿豆大小，而生理盐水组无明显变化，说明32只小鼠造模成功。图1H22荷瘤小鼠造模及给药过程Fig.1TheprocessionofH22-bearingmicemoldmakingandadministration2.2分组与给药将小鼠称重并随机分为模型组、环磷酰胺组、苦瓜醇提物组（MCE）及大孔树脂纯化组（MCM），每组8只。模型组：0.1ml/10g双蒸水，环磷酰胺组：20mg/kg环磷酰胺水溶液；MCE：300mg/kg苦瓜醇提物；MCM：300mg/kg大孔树脂纯化后产物。每天按0.1ml/10g剂量定时灌胃给药一次，连续给药14天。每天观察小鼠行为状态，每隔三天记录一次小鼠
湖北中医药大学2020届硕士学位论文56(a)(b)模型组环磷酰胺组MC-2组01234****细胞凋亡率（%）(c)(d)图2（a）TUNEL染色模型组；（b）TUNEL染色MCM组；（c）TUNEL染色环磷酰胺组；（d）各组小鼠肿瘤组织中的细胞凋亡率，与模型组相比，**P<0.01Fig.2(a)TUNELstainingmodelgroup;(b)TUNELstainingMCMgroup;(c)TUNELstainingcyclophosphamidegroup;(d)Cellapoptosisrateintumortissueofmiceineachgroup，comparedwiththemodelgroup,**P<0.013.4MCM对H22细胞增殖的影响MCM与环磷酰胺均能抑制H22细胞增殖，并有明显的浓度依赖性。由图4可知，当给药浓度从30μg/ml增大到90μg/ml时，两组药物对H22细胞增殖的抑制作用也随之增加，而给药浓度增大到120μg/ml时，MCM给药组对H22细胞增殖的抑制增长速度减缓，而环磷酰胺给药组对H22细胞增殖的抑制率仍在高速增加，浓度增大到150μg/ml时，环磷酰胺给药组对H22细胞增殖的抑制速度也开始减缓。如表3所示，MCM和环磷酰胺抑制H22细胞增殖的IC50值分别为60.48μg/ml和89.96μg/ml。
本文编号：3102476
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大孔吸附树脂纯化部位的HPLC图谱
苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及其作用机制研究37游标卡尺吴江市亿丰电子仪器有限公司剪刀、镊子、注射器、细胞计数板、灌胃针等，其他仪器同第三章。2实验方法2.1H22荷瘤小鼠模型的建立[55-57]建模及给药过程如图1所示。H22肝癌细胞经复苏后注射到小鼠腹腔内进行培养，待7到10天左右小鼠腹水长成后，选取腹部饱满的小鼠，于无菌环境中从腹腔中抽取腹水，离心，除去血细胞，用生理盐水将H22细胞稀释至细胞浓度为2×107/ml，于每只小鼠左大腿根部皮下接种50μl，共接种32只，同时另取8只小鼠每只小鼠左大腿根部皮下接种50μl生理盐水。接种后5~7天，接种H22肿瘤细胞的左大腿根部肿瘤长至绿豆大小，而生理盐水组无明显变化，说明32只小鼠造模成功。图1H22荷瘤小鼠造模及给药过程Fig.1TheprocessionofH22-bearingmicemoldmakingandadministration2.2分组与给药将小鼠称重并随机分为模型组、环磷酰胺组、苦瓜醇提物组（MCE）及大孔树脂纯化组（MCM），每组8只。模型组：0.1ml/10g双蒸水，环磷酰胺组：20mg/kg环磷酰胺水溶液；MCE：300mg/kg苦瓜醇提物；MCM：300mg/kg大孔树脂纯化后产物。每天按0.1ml/10g剂量定时灌胃给药一次，连续给药14天。每天观察小鼠行为状态，每隔三天记录一次小鼠
湖北中医药大学2020届硕士学位论文56(a)(b)模型组环磷酰胺组MC-2组01234****细胞凋亡率（%）(c)(d)图2（a）TUNEL染色模型组；（b）TUNEL染色MCM组；（c）TUNEL染色环磷酰胺组；（d）各组小鼠肿瘤组织中的细胞凋亡率，与模型组相比，**P<0.01Fig.2(a)TUNELstainingmodelgroup;(b)TUNELstainingMCMgroup;(c)TUNELstainingcyclophosphamidegroup;(d)Cellapoptosisrateintumortissueofmiceineachgroup，comparedwiththemodelgroup,**P<0.013.4MCM对H22细胞增殖的影响MCM与环磷酰胺均能抑制H22细胞增殖，并有明显的浓度依赖性。由图4可知，当给药浓度从30μg/ml增大到90μg/ml时，两组药物对H22细胞增殖的抑制作用也随之增加，而给药浓度增大到120μg/ml时，MCM给药组对H22细胞增殖的抑制增长速度减缓，而环磷酰胺给药组对H22细胞增殖的抑制率仍在高速增加，浓度增大到150μg/ml时，环磷酰胺给药组对H22细胞增殖的抑制速度也开始减缓。如表3所示，MCM和环磷酰胺抑制H22细胞增殖的IC50值分别为60.48μg/ml和89.96μg/ml。
本文编号：3102476
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